藤茶止咳化痰作用的研究論文
藤茶俗稱端午茶、藤婆茶。野生藤茶廣泛分布在我省梵凈山地區(qū)，其味甘甜性涼，具有清熱解毒、抗菌消炎、鎮(zhèn)咳祛痰等功效，民間常常用來治療感冒發(fā)熱等疾病的。目前為止還沒有看見有和它相關(guān)的止咳、化痰藥理方面的研究報道。因此筆者對藤茶進行止咳、化痰作用的動物實驗研究，為藤茶的綜合利用提供科學(xué)依據(jù)。
1材料
1.1實驗動物
昆明種小鼠，SPF級，雌雄各半，選用體重18～22g的健康動物，購自中山大學(xué)實驗動物中心，合格證號:粵檢證字SCXK(粵)-2009-0070。
1.2樣品來源與配制
1.2.1藤茶不同方法提取物配制有藤茶水提、石油醚提取、氯仿提取、乙酸乙酯提取4個成分組。每組均折合生藥含量350mg/ml，給藥劑量相當于生藥3500mg/kg體重。
1.2.2藤茶水提成分不同劑量組配制藤茶水提成分高劑量組為直接給藥，折合生藥含量350mg/ml，給藥劑量相當于生藥3500mg/kg體重;中劑量組為藤茶水提物加生理鹽水，按1∶2稀釋后給藥，折合生藥含量117mg/ml，給藥劑量相當于生藥1167mg/kg體重;低劑量組為藤茶水提物加生理鹽水，按1∶8稀釋，稀釋后給藥，折合生藥含量38.9mg/ml，給藥劑量相當于生藥389mg/kg體重。
1.2.3其它樣品配制生理鹽水(氯化鈉注射液)，NaCl含量0.9%;美沙芬陽性對照，含量為15mg/片，取2片溶解于20毫升生理鹽水中，制成懸液，其濃度為3mg/ml，劑量為30mg/kg體重;痰咳凈陽性對照，劑量為200mg/kg體重;陰性對照均采用蒸餾水。
2方法
2.1濃氨水噴霧法研究止咳藥效
取昆明種小鼠120只，隨機分為8組，每組15只。設(shè)陰性(蒸餾水)對照，陽性對照(美沙芬)和藤茶石油醚提取成分組、氯仿提取成分組、乙酸乙酯提取成分組，水提取成分組，其中水提取成分組細分為高、中、低3個劑量組。
實驗前小鼠禁食不禁水12h，然后各組小鼠按0.3ml/20g體重灌胃給藥，其中陰性對照組給等體積蒸餾水。給藥后1h，小鼠接受噴霧，按一定時間噴入濃氨水氣霧，結(jié)束，立即取出小鼠，觀察有無咳嗽反應(yīng)。觀察1min內(nèi)咳嗽次數(shù)，若1min內(nèi)出現(xiàn)3次以上典型咳嗽動作(腹肌收縮或縮胸，同時張大嘴，有時可有咳聲)者，算作“有咳嗽”。否則算作“無咳嗽”。以停止接觸氨水刺激后1min內(nèi)咳嗽次數(shù)大于或等于3次判為陽性，個別動物在實驗中出現(xiàn)死亡或休克，判為咳嗽陽性。用序貫法(上下法)求出引起半數(shù)小鼠咳嗽的噴霧時間(EDT50)。計算值，若值大于130%，說明有的止咳作用。若值大于150%，說明有顯著的止咳作用(陳奇，2006;羅霄山等，2004;羅文敏等，2011)。
EDT50=log-1c/n(式中n為動物數(shù)，c為rx值的總和，r為每劑量組的動物數(shù)，x為劑量(即噴霧時間)的對數(shù)。)=給藥組的.EDT50/對照組的EDT50×100%
2.2對小鼠氣管酚紅排泌量的影響
標準酚紅曲線的繪制:使用分析天平準確稱取一定量的酚紅，用5%碳酸氫鈉溶解，配成每1ml含12.5μg，然后順次進行倍比稀釋成每毫升含酚紅6.25μg、3.125μg、1.5625μg、0.7813μg、0.3906μg、0.1953μg、0.0977μg、0.0488μg，用分光光度計測OD值。以酚紅濃度為縱坐標，OD值為橫坐標，根據(jù)酚紅濃度和OD值計算出回歸方程。根據(jù)回歸方程計算出小鼠酚紅的排泄量(陳奇，2006)。
取昆明種小鼠50只，隨機分為5組，每組10只。
設(shè)陰性(蒸餾水)對照組、陽性(痰咳凈)對照藥物組、藤茶水提取物低劑量組、中劑量組、高劑量組。實驗前小鼠禁食不禁水12h，然后各組小鼠按0.3ml/20g體重灌胃給藥，其中陰性對照組給等體積蒸餾水。給藥后30min，腹腔注射5%酚紅生理鹽水溶液0.2ml/20g，注射后30min，脫頸椎處死小鼠，剪取氣管，將各氣管段放入預(yù)先盛有1.5ml的5%NaHCO3溶液試管中，后置于渦流混合器上震蕩2min，使氣管段中的酚紅完全釋放，檢測前試管中加入1molNaOH溶液0.1ml，離心(3000rpm，5min)，后將試管中溶液于721型分光光度計546nm處測OD值，根據(jù)回歸方程計算出酚紅排泌量。
計算公式:y=0.119x-0.0059x為OD值，y為氣管酚紅排泌量(陳奇，2006;羅霄山等，2004;羅文敏等，2011)。
2.3統(tǒng)計學(xué)處理實驗
數(shù)據(jù)以“均數(shù)±標準差”表示，采用SPSS12.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理。
3結(jié)果
3.1藤茶對濃氨水致咳小鼠的影響
藤茶水提物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物和石油醚提取物，灌胃給藥對刺激小鼠引起咳嗽的耐受時間與陰性對照組比較，均有顯著延長，在統(tǒng)計學(xué)上有顯著差異。其中藤茶水提取物的耐受時間最長，其R值達到210.38%，陽性(美沙芬)對照組的值為225.42%，可見其療效與陽性對照組相當，都達到顯效水平。
鑒于藤茶水提取物止咳作用顯著，又進一步研究藤茶水提物不同劑量組的止咳效果。結(jié)果可見，藤茶高、中劑量組值分別達到210.38%和173.78%都達到顯效水平，低劑量組值為137.09%達到有效水平。綜上，可見藤茶具有良好的止咳作用。
3.2藤茶對小鼠氣管酚紅排泌量的影響
由實驗結(jié)果可知，藤茶水提取物不同劑量灌胃給藥對小鼠支氣管分泌物量與陰性對照組比較，均有顯著增加，在統(tǒng)計學(xué)上有顯著差異。其中藤茶水提取物高、中劑量組氣管酚紅排泌量分別達到4.647±0.903μg/ml和5.424±1.465μg/ml，均高于陽性(痰咳凈)對照組的3.672±0.894μg/ml，說明藤茶水提物高、中劑量組化痰效果優(yōu)于陽性藥物痰咳凈。綜上所述，說明藤茶具有很好的化痰效果。
4結(jié)論
1)藤茶不同方法提取物濃氨水致咳小鼠的實驗，結(jié)果表明藤茶水提物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物和石油醚提取物均顯示出一定的止咳作用，其中藤茶水提物的止咳效果最佳;2)藤茶水提物不同劑量組進行濃氨水致咳小鼠的實驗，結(jié)果表明藤茶水提物高、中劑量組顯示出接近陽性(美沙芬)對照組的止咳效果;3)藤茶水提物不同劑量組進行小鼠氣管酚紅排泌量實驗，結(jié)果表明藤茶水提物高、中劑量組顯示出高于陽性(痰咳凈)對照組的化痰效果。
綜上所述，藤茶具有顯著止咳化痰的作用，這為藤茶的綜合開發(fā)利用提供了科學(xué)依據(jù)。
[參考文獻]
陳奇，2006.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社:625-626.
羅霄山，許家騮，張誠光，2004.咳喘樂顆粒鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用的實驗研究[J].中藥材，27(7):520-523.
羅文敏，尹軍強，鄭先玉，2011.桂龍咳喘寧片止咳化痰平喘藥效學(xué)的研究[J].時針國醫(yī)國藥，22(10):2464-2465.
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