蝴蝶蘭組培的研究進(jìn)展研究論文
蝴蝶蘭，蘭科蝴蝶蘭屬植物，屬熱帶、亞熱帶氣生蘭。原產(chǎn)于菲律賓、印度尼西亞、泰國、馬來西亞和我國臺灣等地，其株型美觀、花形奇特似蝶、枝葉繁茂， 花朵碩大、花色鮮艷、花期持久，觀賞價值極高， 在熱帶蘭中素有“蘭花皇后”的美譽(yù)，有較高的觀賞和經(jīng)濟(jì)價值，深受國內(nèi)外花卉市場的歡迎。但是，由于蝴蝶蘭是單莖性氣生蘭， 植株很少發(fā)育側(cè)枝， 很難采用常規(guī)分株方式進(jìn)行無性繁殖。 其種子也不含胚乳或其他組織， 在自然條件下萌發(fā)率極低， 因此無法利用播種方式進(jìn)行有性繁殖。而采用組織培養(yǎng)方法進(jìn)行種苗繁殖是目前蝴蝶蘭大規(guī)模生產(chǎn)的唯一途徑。蝴蝶蘭快速繁殖的途徑主要是利用無菌播種和利用各種類型的外植體誘導(dǎo)類原球莖， 進(jìn)而誘導(dǎo)分生苗實(shí)現(xiàn)快繁， 不用通過誘導(dǎo)愈傷組織而直接分化叢生芽。
蝴蝶蘭組培快繁的影響因素
1.無菌播種途徑
蝴蝶蘭種子的胚發(fā)育不完全，不易發(fā)芽，用人工合成的培養(yǎng)基促使種子無菌萌發(fā)，可以得到較高發(fā)芽率。種子培養(yǎng)過程中使用的培養(yǎng)基有KC、MS、花寶等，其中改良KC 培養(yǎng)基是蝴蝶蘭種胚萌發(fā)的理想培養(yǎng)基。對不同無菌播種方法包括撒播法、涂布法、稀釋法進(jìn)行了比較，結(jié)果表明稀釋法較好，種子分布均勻，利用率高，明顯減少轉(zhuǎn)接次數(shù)，且原球莖發(fā)育健壯整齊【1】。果齡采收期也影響著無菌播種效果。
也可采用無菌播種途徑快繁蝴蝶蘭，能夠在短期內(nèi)獲得大量幼小植株，且技術(shù)簡單、成本較低，是現(xiàn)階段經(jīng)濟(jì)有效的快速繁殖方法，也是工廠化育苗的重要途徑【2】。但由于蝴蝶蘭種子苗是一種雜交品系，因此后代變異率高，除了少數(shù)自花系列較穩(wěn)定以外，難以形成品質(zhì)均一的大規(guī)模栽培品種。因此，在采用無菌播種進(jìn)行蝴蝶蘭種苗生產(chǎn)時，要對父母本進(jìn)行嚴(yán)格的選擇，以確保后代性狀的盡可能一致。
2.類原球莖途徑
原球莖是蘭科植物組織培養(yǎng)產(chǎn)生的特有現(xiàn)象，通過離體器官誘導(dǎo)原球莖快繁法獲得試管苗基本一致，增殖系數(shù)較高，變異性較少，適合大規(guī)模繁殖，是蘭花組培快繁的一個主要形式。
近年來， 國內(nèi)外學(xué)者對蝴蝶蘭的組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行了大量研究， 蝴蝶蘭組織培養(yǎng)誘導(dǎo)原球莖的外植體有莖尖、葉片、花梗腋芽、花梗節(jié)間切段等誘導(dǎo)類原球莖， 進(jìn)而誘導(dǎo)分生苗實(shí)現(xiàn)快繁。
蝴蝶蘭的`繁育方法有兩種叢生芽和原球莖增殖。原球莖增殖容易出現(xiàn)變異，采用叢生芽增殖能夠很好的保持原有品種的特性【3】。還可利用花梗腋芽、葉片等作為外植體接種在不同培養(yǎng)基上進(jìn)行離體培養(yǎng)，再利用誘導(dǎo)產(chǎn)生的不定芽的莖尖進(jìn)行莖尖培養(yǎng)，可得到大量的原球莖狀體【4】。由于莖尖作外植體誘導(dǎo)原球莖誘導(dǎo)率、周期性，但損傷母株，而且還會有不同程度的污染率【5】，故利用腋芽萌發(fā)的不定芽的幼葉為外植體，雖然誘導(dǎo)率稍低，但大大降低了污染率。
大量研究表明， 在蝴蝶蘭進(jìn)行組織培養(yǎng)過程中， 選取的外植體不同， 原球莖的誘導(dǎo)率也有很大差異， 其中幼葉、莖尖、花梗腋芽是蝴蝶蘭原球莖誘導(dǎo)的較佳外植體， 葉片和根段的誘導(dǎo)效果最差。但是，采用莖尖作外植體會對植株造成損傷，因此蝴蝶蘭的組織培養(yǎng)通常以幼葉或花梗腋芽為外植體。
3.培養(yǎng)基的選擇與激素的添加
蝴蝶蘭組織培養(yǎng)采用的基本培養(yǎng)基有MS、1/2MS、VW、B5、KC、花寶及其改良型等。在原球莖的誘導(dǎo)過程中，不同的蝴蝶蘭品種和外植體對最適培養(yǎng)基的選擇有所不同，其中以MS基本培養(yǎng)基最為常用，且適當(dāng)減少培養(yǎng)基中大量元素和部分微量元素的添加量有利于原球莖的增殖。
一般情況下，原球莖在基本培養(yǎng)基上即可增殖、分化，但在基本培養(yǎng)基中附加適量激素或其他添加物可顯著促進(jìn)原球莖的增殖與分化。目前，在蝴蝶蘭組織培養(yǎng)中常用的激素有GA3、6 - BA、NAA、2， 4 - D 和IAA等。
蝴蝶蘭組織培養(yǎng)中不同階段對培養(yǎng)基和激素配比的要求也不同【6】。蝴蝶蘭無菌播種誘導(dǎo)胚狀體以MS7為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加100 g/L新鮮土豆汁效果較好，有利于原球莖的分化和生長。在誘導(dǎo)胚狀體時激素濃度要求較低，在胚培養(yǎng)時，只加MS培養(yǎng)基的部分成分即可，添加細(xì)胞分裂素和生長素易使胚生長畸形或抑制胚的生長。并在MS7培養(yǎng)基中，隨著NAA濃度的升高，生根率呈現(xiàn)先升后降的趨勢，單獨(dú)使用NAA誘導(dǎo)生根，濃度以0.5 mg/L為好，高濃度BA抑制生根。因此，誘導(dǎo)蝴蝶蘭生根的較為理想的激素配比為BA0.1 mg/L+NAA0.5 mg/L，植株生根率高，根數(shù)多，生根長。
利用已過盛花期帶休眠芽的花梗作為外植體材料，通過對不同配比的培養(yǎng)基和激素的選擇，其中發(fā)現(xiàn)花梗腋芽最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為1/2MS+BA2.5 mg/L+NAA0.2 mg/L，即隨著BA濃度的增大，蝴蝶蘭花梗腋芽誘導(dǎo)率逐漸升高，在相同時間內(nèi)，細(xì)胞分裂素的增加，芽誘導(dǎo)率也隨之增加【3】。繼而利用不同激素和濃度的培養(yǎng)基對蝴蝶蘭進(jìn)行增殖培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)：1/2MS+BA3. 5 mg/l+KT1.0 mg/L+NAA0.5mg/L+10%椰汁最有利于蝴蝶蘭叢生芽的增生，且葉片健壯。
取花梗腋芽誘導(dǎo)獲得的無菌苗的葉片作叢生芽誘導(dǎo)材料、莖尖作原球莖誘導(dǎo)的材料。研究發(fā)現(xiàn)：花梗腋芽的叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基以1/2MS+6-BA5.0 mg/L+NAA2.0+CM15%培養(yǎng)基最合適，其中增殖仍需高濃度6-BA與低濃度的NAA混合使用。葉片誘導(dǎo)叢生芽以1/2MS+6-BA5.0 mg/L +NAA2 mg/L+香蕉泥10.0%+AC0.2%的培養(yǎng)基最宜，可見葉片叢生芽誘導(dǎo)仍需較高濃度的6-BA 和中等濃度的NAA 及香蕉泥混合使用【4】。叢生芽增殖階段1/2 MS+6-BA7 mg/L+NAA0.5 mg/L+香蕉泥10%+AC0.2%培養(yǎng)基效果最好，可見叢生芽的增殖仍需高濃度6-BA與低濃度的NAA 混合使用。
4光譜LEDs的影響
光譜對植物的生長發(fā)育、形態(tài)建成、光合作用、物質(zhì)代謝以及基因表達(dá)均有調(diào)控作用， 通過光質(zhì)調(diào)節(jié)和控制植株形態(tài)建成和生長發(fā)育， 可使植株在一定程度上滿足人們生產(chǎn)需要。單色紅光處理的蝴蝶蘭組培苗徒長， RBG(紅光/藍(lán)光/綠光) 處理組全部生根， 單色藍(lán)光處理的組培苗根系活力最高。紅藍(lán)組合和單色藍(lán)光處理的葉片色素含量高于白光， 葉綠素a /b比值、葉綠素a /類胡蘿卜素比值
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