麒麟竭中龍血素A的藥動力學研究論文示例

　　1儀器與材料

　　1.1動物

　　SD大鼠66只，體質量（250±20）g，雌雄兼備，由中山大學醫學院動物中心提供，合格證號：（粵）2006A064。

　　1.2儀器

　　Waters高效液相色譜儀：515 HPLC泵，2487雙波長吸收監測器，N-2000雙通道色譜工作站（浙江大學智能信息工程研究所）；TDL80-2B臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）；SCQ5201超聲儀（上海超聲波儀器廠）；ZH-2 BLENDER渦旋混合器（天津藥典標準儀器廠）。

　　1.3材料

　　廣西產龍血竭（廣西中醫學院制藥廠提供）；龍血素A對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號：200402）；乙腈、甲醇（色譜純），乙酸乙酯、無水乙醇、冰醋酸（分析純）。

　　2方法與結果

　　2.2血樣的采集和處理

　　大鼠禁食（自由飲水）12 h后，按100 g大鼠給予龍血竭250 mg，灌胃給藥。分別在第0、0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、10 h于頸動脈取血，置于用肝素預處理過的離心管中。取全血1 mL置離心管中，加入乙腈2 mL、乙酸乙酯1 mL，渦旋混合均勻，3 000 r·min-1離心10 min，取上清液，提取3次，合并上清液，50 ℃水浴揮干，于殘渣中加入100 μL甲醇，超聲處理使之溶解，12 000 r·min-1離心10 min，取上清液作為樣品，注入高效液相色譜儀進行測定，記錄色譜圖與峰面積，采用外標法定量。

　　2.3方法學考察[3]

　　2.3.1龍血素A對照品貯備液的制備取龍血素A對照品，用甲醇配制成每1 mL約含100 μg的溶液，作為對照品貯備液。

　　2.3.2方法專屬性取大鼠2只，實驗前禁食12 h，自由飲水，1只做空白對照，1只按100 g給予龍血竭250 mg灌胃給藥，給藥2 h后取血樣，按“2.2”項下方法操作測定。由圖1可見，全血中的內源性物質不干擾龍血素A的測定，表明本方法有較好的.專屬性。[PSD261;S*2〗A.空白血漿； B.空白血漿+對照品； C.樣品圖1 HPLC圖譜Figure 1HPLC chromatograms

　　2.3.3標準曲線與最低檢測限取空白全血適量，精密加入龍血素A對照品儲備液，配制質量濃度為0.076、0.151、0.302、0.605、1.209、2.418、4.836 μg·mL-1的系列濃度標準溶液，按“2.2”項下的方法，自“加乙腈2 mL、乙酸乙酯1 mL”起，依法操作，記錄峰面積。以質量濃度（ρ）為橫坐標，峰面積（A）為縱坐標進行回歸，結果表明龍血素A的質量濃度在0.076～4.836 μg·mL-1范圍內與峰面積線性關系良好，回歸方程為：A=49679ρ+2784.3，r=0.998 3（n=7）。取標準曲線用溶液，逐步稀釋至溶液中龍血素A的響應值約為基線噪音的3倍（S/N=3），記錄色譜圖，得出最低檢測限（LOD）為0.025 μg·mL-1。

　　2.3.4相對回收率與精密度精密量取對照品儲備液，以空白全血分別配成高、中、低3種質量濃度（4.836、1.209、0.076 μg·mL-1）的樣品溶液，按 “2.2” 項下的方法，自 “加乙腈2 mL、 乙酸乙酯 1 mL”起，依法操作。記錄峰面積并代入標準曲線計算各樣品濃度，計算相對回收率。結果表明，高、中、低3個質量濃度的樣品的相對回收率均高于80%。見表1。取以上高、中、低3個質量濃度的樣品溶液于同一天內連續測定3次，計算日內RSD;每天測定3種濃度樣品各1次，連續測定3 d，計算日間精密度RSD。結果日內和日間精密度RSD值均小于10%，表明該法精密度較好。見表1。

　　2.3.5樣品穩定性精密量取對照品儲備液，以空白全血配制質量濃度為0.076、0.605、1.209、2.418 μg·mL-1的樣品，分別考察室溫25 ℃放置0、4、12、24 h，-20 ℃冰箱放置24 h，-20 ℃下反復凍融3次的穩定性。結果各樣品的RSD值均在2.76%～11.42%（n=6）之間，符合《中國藥典》相關規定，表明樣品穩定性較好。

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