核酸實驗室污染處理方案
一、核酸實驗室介紹
核酸檢測實驗室也就是我們所說的PCR實驗室，實驗室原則上分為4個單獨的工作區域，試劑準備區、標本制備區、擴增區和產物分析區，當然有些實驗室也會有擴增區和產物分析區，標本制備區的空間要大一點。
用換風次數保證實驗室的潔凈度，其實核酸檢測實驗室要求最高的就是各個區域的正負壓，而且這些具備單相的人流、物流、和氣流。
二、核酸實驗室污染處理方案（精選5篇）
核酸是由許多核苷酸聚合而成的大分子化合物，其實也是蛋白質生物合成必不可少的物質，是生物遺傳的物質基礎，份子結構相對而言，隨著現在人們對病毒的認識，核酸也越來越重要。以下是小編精心整理的核酸實驗室污染處理方案（精選5篇），僅供參考，大家一起來看看吧。
核酸實驗室污染處理方案1
目前國內所有二級以上綜合醫院都具備了核酸檢測能力，大部分醫院也設立了PCR實驗室，高強度的核酸檢測任務已然成為了我們檢驗人的工作常態，但是，如果一旦出現實驗室污染，可能會造成假陽性結果，導致結果不可信，甚至可能會危及實驗室工作人員安全。
應對核酸檢測實驗室污染的最好辦法就是防患于未然，今天就帶大家了解一下實驗中我們如何避免和減少污染的產生以及處理污染。
一、污染的產生
在新冠病毒核酸檢測過程中，常見以下幾種污染類型：擴增片段的污染（產物污染）；天然基因組DNA的污染、試劑污染（貯存液或工作液）以及樣本間交叉污染。核酸檢測實驗室污染的主要來源是擴增產物的污染。
實驗室應通過以下途徑及時發現污染：
1、采用每次檢測過程至少3個陰性對照隨機置于臨床樣本中間參與提取全過程。
2、每天對實驗室內空氣進行采樣監測。空氣監測范圍應至少應包括樣本制備區和擴增產物分析區。
3、定期對實驗室臺面、門把手、儀器設備表面進行取樣監測。
4、陽性樣本采用另外一到兩種更為靈敏且擴增不同區域的核酸檢測試劑對原始樣本進行復核檢測。
二、污染的防控
01嚴格實驗室功能分區
原則上新冠病毒核酸檢測實驗室應當設置以下區域：試劑儲存和準備區、樣本制備區、擴增和產物分析區。
根據使用儀器的功能，區域可適當合并。各區域在物理空間上應當是完全相互獨立的。傳遞窗滿足密封性要求，不能有空氣的直接相通。各項檢測工作應嚴格按相應規定在各自的區域內進行，嚴禁在樣本制備區配制試劑。
各區的功能是：
1、試劑儲存和準備區：貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴增反應混合液的制備，以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準備。
2、樣本制備區：轉運箱的開啟，樣本的滅活（適用時），核酸提取及其加入至擴增反應管等。
3、擴增和產物分析區：核酸擴增和產物分析。
02確保實驗室人、物及空氣單向流動
核酸檢測實驗室的人、物及空氣流向按照試劑儲存和準備區→樣本制備區→擴增和產物分析區，防止擴增產物隨人流、物流及空氣進入擴增前的區域�？諝饬飨驊凑諒脑噭﹥Υ婧蜏蕚鋮^→樣本制備區→擴增區→擴增產物分析區方向空氣壓力遞減的方式進行。
03實驗室檢測安全管理
�。�1）基本要求
核酸檢測應當在生物安全二級實驗室進行，并應在生物安全風險評估的基礎上，采取適當的個體防護措施，包括手套、口罩和隔離衣等。開展新冠病毒核酸檢測的實驗室應當制定實驗室生物安全相關程序文件及實驗室生物安全操作失誤或意外的處理操作程序，并有記錄。
（2）實驗室前安全要求
應使用0.2%含氯消毒劑或75%酒精進行桌面、臺面及地面消毒。消毒液需每天新鮮配制，不超過24小時。轉運至實驗室的標本轉運桶應在生物安全柜內開啟。轉運桶開啟后，使用0.2%含氯消毒劑或75%酒精對轉運桶內壁和標本采集密封袋進行噴灑消毒。取出標本采集管后，應首先檢查標本管外壁是否有破損、管口是否泄露或是否有管壁殘留物。確認無滲漏后，推薦用0.2%含氯消毒劑噴灑、擦拭消毒樣品管外表面（此處不建議使用75%酒精，以免破壞標本標識）。如發現滲漏應立即用吸水紙覆蓋，并噴灑有效氯含量為0.55%的含氯消毒劑進行消毒處理，不得對標本繼續檢測操作，做好標本不合格記錄后需立即進行密封打包，壓力蒸汽滅菌處理后銷毀。
如為采樣管為非滅活管，實驗室操作人員在進行標本熱滅活時，溫浴前需旋緊標本采集管管蓋，必要時可用封口膜密閉管蓋；溫浴過程中可每隔10分鐘將標本輕柔搖勻1次，以保證標本均勻滅活；溫浴后標本需靜置至室溫至少10分鐘使氣溶膠沉降，隨后再開蓋進行后續核酸提取。
（3）核酸提取和檢測安全要求
標本進行核酸提取和檢測時應盡可能在生物安全柜內進行操作。如為打開標本管蓋或其他有可能產生氣溶膠的操作，則必須在生物安全柜內進行。
（4）實驗室結束后清潔要求。
需要對實驗室環境進行清潔，消除可能的核酸污染。
�、賹嶒炇铱諝馇鍧崱嶒炇颐看螜z測完畢后，可采用房間固定和/或可移動紫外燈進行紫外照射2小時以上。必要時可采用核酸清除劑等試劑清除實驗室殘留核酸。
②工作臺面清潔。每天實驗后，使用0.2%含氯消毒劑或75%酒精進行臺面、地面清潔。
�、凵锇踩裣尽嶒炇褂煤蟮暮牟膹U棄物放入醫療廢物垃圾袋中，包扎后使用0.2%含有效氯消毒液或75%酒精噴灑消毒其外表面。手消毒后將垃圾袋帶出生物安全柜放入實驗室廢棄物轉運袋中。試管架、實驗臺面、移液器等使用75%酒精進行擦拭。隨后關閉生物安全柜，紫外燈照射30分鐘。
�、苻D運容器消毒。轉運及存放標本的容器使用前后需使用0.2%含氯消毒劑或75%酒精進行擦拭或噴灑消毒。
�、菟芰匣蛴袡C玻璃材質物品清潔：使用0.2%含氯消毒劑或過氧乙酸或過氧化氫擦拭或噴灑。
�。�5）轉運容器消毒
轉運及存放樣本的容器使用前后需使用有效氯含量為0.2%的消毒劑或75%酒精進行擦拭或噴灑消毒。
04強化實驗室檢測過程控制
實驗室接到樣本后，應當在生物安全柜內對樣本進行清點核對。按照標準操作程序進行試劑準備、樣本前處理、核酸提取、核酸擴增、結果分析及報告。實驗室應當建立可疑樣本和陽性樣本復檢的流程。
（1）試劑準備
應當選擇國家藥品監督管理部門批準的試劑，并在選擇樣本采樣管和核酸提取試劑時，使用試劑盒說明書上建議的配套樣本采樣管和提取試劑。
�。�2）樣本滅活
已經使用含肌鹽的滅活型樣本采樣管的實驗室，這一環節無需進行滅活處理，直接進行核酸提取。使用非滅活型樣本采樣管的實驗室，可采用56℃孵育30分鐘熱滅活的處理方式。
�。�3）核酸提取
將滅活后的樣本取出，在生物安全柜內打開樣本采樣管加樣。核酸提取完成后，立即將提取物進行封蓋處理。在生物安全柜內將提取核酸力口至PCR擴增反應體系中。
（4）核酸擴增
將擴增體系放入擴增儀，核對擴增程序是否與試劑說明書相符，啟動擴增程序。擴增后的反應管不要開蓋，直接放于垃圾袋中，封好袋口，按一般醫療廢物轉移出實驗室處理。
三、污染的消除
實驗室一旦發生污染，檢測工作應立即停止，直到確認消除污染后才能重新開始檢測。首先，要查找污染源和明確污染范圍。然后，根據污染源和污染范圍采取有效的去污染措施，結合各種不同方法以達到最佳效果。
實驗室污染的處理：
1.標本污染生物安全柜的操作臺造成局限污染時：立即用吸水紙覆蓋，并使用0.55%含氯消毒劑進行噴灑消毒。消毒液需要現用現配，24小時內使用。
2.標本傾覆造成實驗室污染時：
保持實驗室空間密閉，避免污染物擴散。立即使用潤濕有0.55%含氯消毒劑的毛巾覆蓋污染區。必要時（如大量溢撒時）可用過氧乙酸加熱熏蒸實驗室，劑量為2g/m，熏蒸過夜；或20g/L過氧乙酸消毒液用氣溶膠噴霧器噴霧，用量8ml/m，作用1-2小時；必要時或用高錳酸鉀-甲醛熏蒸：高錳酸鉀8g/m，放入耐熱耐腐蝕容器（陶罐或玻璃容器），后加入甲醛（40%）10ml/m，熏蒸4小時以上。熏蒸時室內濕度60%-80%。
3.清理污染物時：
嚴格遵循活病毒生物安全操作要求，采用壓力蒸汽滅菌處理，并進行實驗室換氣等，防止次生危害。
核酸實驗室污染處理方案2
發現污染第一步就是要暫停實驗，評估假陽性對以往檢測結果的影響。對實驗進行徹底打掃和清理，盡可能更換相關的試劑耗材，對儀器設備進行清潔和去核酸處理。
1.化學處理法
使用商品化的核酸去除劑，核酸去除劑是一種非堿性、無腐蝕性的核酸去除溶液，對人體無害的非致癌性物質組成，通過對基礎RNA和DNA的非可逆性摧毀，達到去除核酸污染的目的。對人體無毒無害。
2.物理處理法
使用紫外燈照射。
核酸污染處理的難點
1.移液器
移液器內部被污染很難去除，可以通過清洗或者另換一套移液器。
2.生物安全柜
移除內部所有物品，用核酸去除劑擦拭表面后，打開柜門連續運行。
3.核酸提取儀內部
用核酸去除劑擦拭內表面后，打開提取儀門或外罩，靜置。
如果能及時發現污染，通常情況不會太嚴重，采取上述措施實驗室空置幾天污染會消除。但是如果發生了很嚴重的污染，采取上述措施污染仍不能消除，就要采取專業的設備方案進行去除：
歐菲姆核酸干霧消毒器，采用獨有的干霧發散遠離，配合低溫冷蒸發技術，可以將核酸去除液發散成平均粒徑1微米的顆粒。均勻的擴散在空氣中，無死角的覆蓋在整個核酸實驗室，并快速吸附空氣中的氣溶膠，分解掉核酸污染源。
歐菲姆核酸去除干霧消毒器適用于微生物實驗室、動物房實驗室、PCR實驗室、P3及P4實驗室，是當下國內去除PCR實驗室核酸污染的`佼佼者。
核酸實驗室污染處理方案3
疫情在全球的大流行對各國公共衛生和全球經濟造成嚴重威脅，了解和遏制新冠病毒的環境傳播模式對各國制定相關公共衛生政策至關重要。早發現并進行流動性管控是快速控制新冠病毒傳播的方法，新冠病毒核酸熒光定量PCR檢測由于其高靈敏度和準確性成為公認的金標準。
在新冠病毒檢測中，核酸檢測結果是主要的判定依據，而分子實驗室環境的清潔程度是保證核酸檢測結果準確的必要條件。高效DNA清除劑能夠降解長片段核酸和PCR后短片段核酸產物，經過電泳未見明顯條帶；通過qPCR檢測核酸剩余量，顯示清除效率達到了99.9%；對桌面、儀器等表面處理，其表面累積的核酸量也有很明顯的降低。DNA清除劑為分子實驗室日常清潔處理和已發生核酸污染的實驗室處理提供了解決思路。
分子診斷實驗室常見的消毒殺菌方法：
1、紫外光照射和高壓滅菌來處理實驗耗材中的DNA污染，有實驗證明，高壓滅菌（128℃，420min）后，再次干燥，暴露于10~60J/cm2的紫外光照射下能夠清除，但此方法耗費時間長并且紫外線透射度有限、高壓滅菌對耗材有選擇性等局限。
2、無菌醫療產品常用環氧乙烷（EO）氣體來滅菌，通過EO處理3h可使PCR擴增的DNA減少104個數量級，因此利用EO來阻止DNA擴增的方法是有效的，但是EO并不能完全清除DNA污染，且作用后會有副產物遺留，導致這種方法難以在分子實驗室應用。
因此，需要尋求一種更便捷的辦法來預防或減少核酸污染。核酸清除劑是目前市面上商品化使用的專門清除核酸污染的試劑，針對性強、效果好且毒性小。潤聯環保旗下的諾沃賽德核酸清除液，諾沃賽德Novocide是國內唯一一款可以用于空間噴霧的核酸去除劑，試劑特點：不含過氧化氫，PH值接近中性，不含酶，強效的DNA的片段捕捉粘合劑，腐蝕性極低。
諾沃賽德核酸污染去除液，能夠強力高效的去除實驗室中核酸污染問題。搭配比林科漢核酸污染清除儀能夠達到1+1>2的效果。比林科漢核酸污染清除儀采用獨特的干霧發散原理，超高速噴射，可以將核酸清除劑發散成小于1微米的顆粒，均勻擴散到空氣中，以氣溶膠的形式捕獲核酸片段并分解掉污染源。其優點是覆蓋面積廣，納米級干霧滲透性好，氣溶膠均勻擴散，智能化系統，單位用量少成本低。非常適合分子診斷實驗室去除核酸污染。
核酸實驗室污染處理方案4
由于疫情的突發，各地PCR基因擴增實驗室的建設也逐步加快，病毒核酸檢測是診斷的重要標準，pcr實驗室又稱為基因擴增實驗室，利用分子生物學技術，通過放大核酸片段，也可以看做是生物體外的特殊核酸復制。利用基因追蹤系統，掌握人體內部的病毒含量，試驗的精確度可達到納米級別，核酸檢測也屬于此類技術，診斷的重要標準。
PCR基因擴增實驗室主要就是對檢測核酸模板進行擴增，由此可見，易出現的就是對實驗室交叉污染而導致檢測的標本出現假陽性結果，所以，PCR實驗室對預防交叉污染有著嚴格的設計要求和標準。
現在PCR技術已經在傳染病、腫瘤靶向、生殖遺傳等領域被廣泛應用，但因為該技術對待測核酸進行了多次、大量的擴增，所以即使極微量的污染也容易導致結果出現假陽性；其次PCR技術要求相對較高，實驗過程繁復，中間環節如果出現遺漏疏忽，就有可能導致結果假陰性。
PCR實驗過程中易發生污染產生污染主要有以下4個原因：
1、是PCR擴增產物的污染。這也是見的污染原因。PCR產物經反復多次的擴增，其復制量遠遠超過PCR的檢測極限，所以即使是極微量的污染也足以造成實驗結果假陽性。
2、試劑的污染。在試劑的配制過程中，接觸了污染的容器、移液器、槍頭、溶液等物導致試劑被污染。
3、待測樣品被污染。放置樣品的容器被污染或由于容器密封不嚴導致樣品與外界接觸被污染；其次在核酸提取過程中使用了被污染的移液器或槍頭導致樣品被污染；另外，某些樣品中含毒，若彌散到空氣中則有可能形成交叉污染。
4、氣溶膠污染。若氣溶膠中包含病毒等污染物擴散至空氣中極有可能造成PCR產物污染。氣溶膠是由空氣與液體表面摩擦而產生的，開蓋、晃動反應管及污染加樣器的反復吸樣都可形成氣溶膠從而導致交叉污染。據計算一個氣溶膠顆�？珊�48000拷貝，因此，應尤其重視由氣溶膠導致污染的問題。PCR實驗室只要出現了污染，之前的結果報告就變為無效而且也無法進行其他的實驗操作。必須找出并清除污染源，才能得到準確有效的實驗結果。
Pcr實驗室如何進行空間消毒預防污染？
針對pcr實驗室的消毒，法國進口的歐菲姆干霧滅菌設備，采用先進的過氧化氫干霧滅菌技術，達到枯草芽孢桿菌2.5×10的6次方的殺滅率。方便快捷，滅菌時間快，腐蝕性極低，安全無殘留。
法國歐菲姆過氧化氫干霧滅菌器采用了進的霧化技術，霧化顆粒小于3微米，增效了空間擴散均勻性，迅速彌漫充滿整個空間，不放過每一處死角，滅菌效果。適應大空間滅菌，小空間滅菌更靈活。
歐菲姆過氧化氫滅菌優勢：
1、殺菌效果好，對嗜熱脂肪桿菌芽孢10分鐘有6個對數值的殺滅率，快速高效去除實驗室核酸污染源。
2、廣譜的殺菌能力，能殺滅包括病原菌、芽孢、及病毒在內的200多種微生物。
3、干霧顆粒，擴散性非常優良，能擴散到每一個衛生死角落，在空氣中做不規則布朗運動。
4、無殘留，安全可靠，分解。驗證資料齊全，提供驗證模板。
5、殺菌時間超短，設備體積小，操作方便，靈活移動滿足不同空間需求，適應大空間滅菌。
核酸實驗室污染處理方案5
近年來，核酸檢測技術在我國得到逐步的推廣和應用，并已成為血液篩選查實實驗室的重要實驗手段，但因其靈敏度高的特點，同時實驗室也容易導致污染，特別是核酸的氣溶膠污染比較嚴重。如何預防和處理PCR核酸實驗室污染為本文討論的重點。
關鍵詞：分子診斷，核酸檢測，核酸污染，DNA，RNA，PCR，DNA測序，原位雜交，SNP，基因芯片，假陽性。
核酸污染是困擾絕大多實驗室的一個難題。微量的核酸污染會產生假陽性的檢測結果，這樣會對病人造成誤診，耽誤病情。如任由此情況發展，會形成氣溶膠污染而擴散，終導致整個實驗室的污染，嚴重的會關閉實驗室，如無備用實驗室，會造成更大的損失。是否有一種快速徹底的解決方案呢？且看下面。
分子診斷是指利用分子生物學方法來檢測樣品中遺傳物質的結構或表達水平的變化從而做出相應診斷的技術。由于分子生物技術的發展，人們生活水平不斷提高記憶對健康問題更為重視，分子診斷得以迅猛發展，市場份額快速提高。我國分子診斷產業雖然起步較晚，但現已與歐美，日本，新加坡等起步較早的國家之間的的差距也越來越小。
而由于日常檢測中要處理大量的不同來源的核酸以及核酸本身難以降解的特性，核酸污染是困擾絕大多實驗室的一個難題。微量的核酸污染會產生假陽性的檢測結果，這樣會對病人造成誤診，耽誤病情。如任由此情況發展，會形成氣溶膠污染而擴散，終導致整個實驗室的污染，嚴重的會關閉實驗室，如無備用實驗室，會造成更大的損失。
在與核酸污染長期抗爭中，人們也總結出了一些預防和清除核酸污染的方法。對于預防，實驗人員一定要不斷改進并嚴格遵循實驗室操作流程，對實驗室不同操作進行區域劃分，分裝試劑，定期對實驗儀器進行滅菌，實驗室適當通風，養成實驗中進行陰陽對照的好習慣。
當污染已經出現，傳統的清除方法包括對可疑器用稀酸進行擦拭或浸泡，紫外線照射，對反應液用DNaseⅠ或內切酶進行處理等方法。這些方法對一些微量污染會有一定效果，但對污染效果不是很理想，而且紫外線照射會對人體造成一定的危害。
污染傳統處理方法：
準備（1：50）、（1：10）高效消毒液，75%無水酒精。
2.5.1把STAR上的所有載架都拿出來，用1：50的高效消毒液進行擦拭，待作用五分鐘后用清水沖洗。
2.5.2SATR內部用噴壺噴灑75%無水酒精，底部金屬部分可用1：50的高效消毒液進行擦拭，待酒精完全沉降后，用清水擦拭。
2.5.3實驗室內工作臺用1：10的高效消毒液進行擦拭，實驗室內部用噴壺噴灑1：50的高效消毒液，等待空氣中的高效消毒液沉降后，用1：50的高效消毒液拖地，建議當天不用清水擦拭或拖地，待第二天早上來再用清水擦拭拖地。
2.5.4實驗室用的耗材（除用自封袋封好的），能滅菌的，均用備用滅菌鍋進行一次滅菌。
2.5.5機器通道污染的處理，將配置好的高效消毒液（1：50）代替裂解液，加入裂解液槽里，完成加裂解液的過程，在機器每次吸取一定量的高效消毒液后，暫停十分鐘，讓高效消毒液揮發到通道內部，反復四次即可，這個過程中用的槍尖同樣不帶濾芯。后將裂解液槽里的高效消毒液（1:50）用水洗凈后換上蒸餾水重復以上程序。（此類方法正常情況下不建議使用，只有在污染去除不了時才慎重使用。用該方法處理過機器后，當天不再做核酸實驗）。
總之，對于核酸污染大家一定要給予足夠的重視，提前預防，不要等到污染已經出現才想辦法清除，經常在實驗室中配備清除污染的試劑，發現污染可馬上進行處理，相信這樣核酸污染將不再是讓眾多實驗人員頭疼的問題。
注：實驗室的污染不可能一次就清理干凈，需反復清理驗證，直到實驗結果能被采用為止。
核酸實驗室污染的主要原因有：
1）標本污染；2）試劑污染；3）產物污染；5）其他污染。
其解決措施為：其解決措施為：
1）標本污染，重新采樣進行檢測，評估標本前處理環節；
2）試劑污染，更換新的試劑重新檢測評估；
3）設備污染，設備整體消毒清潔、維護；
4）產物污染，全面清潔消毒實驗室、儀器設備所有實驗有關用品。一旦發生污染后，圍繞實驗室尋找污染源分析污染原因耗時且很繁瑣，所以防止污染重在預防。
因核酸實驗室污染后極其難以清除，有可能造成實驗室不能使用的風險。但是如果一旦出現核酸實驗室污染，除了上面常規的消毒清潔方法之外，另外還有一種比較好使而且快速全面徹底的實驗室空間滅菌方法。根據國外DNA研究所大量實踐證明空間熏蒸消毒確實有效去除核酸污染源，時間短、高效、安全、節省勞動力等等優點。此空間熏蒸消毒方法為法國過氧化氫干霧消毒技術，整體核酸實驗室覆蓋，無死角，快速分解掉核酸污染源，消毒完后，隨著排風即可清除而無殘留，省時省力。特別適用核酸實驗室氣溶膠污染。
在眾多的過氧化氫消毒技術當中，據大數據得知，法國的過氧化氫干霧消毒技術由oxypharm制造的消毒機力壓群雄，成為行業消毒去除PCR實驗室核酸污染的佼佼者。（高效并且持久）
法國oxy過氧化氫干霧消毒方案的精妙之處在于的解決方案，巧妙利用了特別的干霧設備+過氧化氫殺孢子劑（高純低濃度）的完美配合，組成無懈可擊空間消毒方案，避免了過氧化氫蒸汽的腐蝕性和解決了擴散性問題。
oxypharm過氧化氫消毒器采用獨到而特殊的結構設計，使得在僅僅輸入電能的情況下，集壓縮、ventur噴射和霧滴內外部濺射碎化功能于一體，使專用液態殺孢子劑變成氣霧狀態極微小顆粒噴出，高速極小微粒與空氣接觸后充分氣化，變成氣態過氧化氫即為“干霧”。此干霧具備良好的擴散性和細菌殺滅效果。
此過氧化氫干霧消毒器的特點為：
1、滅菌效果好，生物指示劑挑戰降低6lg對數值，能徹底殺滅環境中的MRSA、VRE、結核分枝桿菌、芽孢、病毒和多重耐藥的革蘭陰性菌（鮑曼不動桿菌）；
2、活性氫氧基團能高效分解DNA、RNA污染源及核酸酶等分子物質；
3、快速空間滅菌，比起噴霧或熏蒸所需要的時間更短，實現更快速的密閉空間滅菌措施，預防核酸實驗室環境空氣污染及核酸片氣溶膠污染，及快速高效去除實驗室核酸污染源；
4、小于3微米干霧氣體，擴散性優越，能擴散到每一個角落，空氣中做布朗運動，消毒干霧無孔不入，專門對付小分子核酸污染源物質；
5、消毒干霧相對一般過氧化氫穩定，自然損耗小，維持的滅菌濃度均勻，基本不受溫度、環境濕度的影響（真正的干霧才能做到這點）；
6、無色無毒，無殘留，安全可靠，當天使用消毒清除污染，當天即可使用實驗室，換回損失。
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