促骨方對家兔實驗性骨折愈合的影響及鎮痛作用討論論文
軟組織損傷，中醫稱為傷筋，是指人體骨骼周圍的皮膚、皮下組織、肌肉、肌健、筋膜、韌帶、腱鞘、關節囊等組織的損傷。受傷后，筋肉或損或斷，經脈絡脈隨之受傷，氣血互阻，血腫形成，引起疼痛、腫脹和功能障礙。四肢骨折的早期同樣存在軟組織損傷，瘀血阻滯是其主要的病理機制，故二者均表現為局部腫脹、疼痛、活動受限。促骨方具有活血散瘀、消腫止痛的功效，用于急性軟組織損傷及骨折中、早期瘀血阻滯所致的腫脹、疼痛及肢體功效障礙。針對其功能主治，本研究對促骨方促進家兔橈骨骨折模型的'愈合作用進行了藥效學研究。
1 材料與儀器
1. 1 實驗動物
普通級新西蘭兔，體質量( 2 ±0. 2) kg，雌雄各半，由長沙市東創實驗動物科技服務部提供，合格證號: 20101696。SPF 級昆明小鼠，體質量( 20 ± 2) g，雌雄兼用，由長沙市東創實驗動物科技服務部提供，合格證號: 20101694。
1. 2 藥物與試劑促骨方，由湖南省中醫藥研究
院中藥研究所制劑實驗室提供，1 g 浸膏粉相當于4. 67 g 生藥( 處方系湖南省中醫藥研究院李若存研究員的臨床經驗方: 由三七、丹參、積雪草、槐米組成) 。藥材委托湖南省九旺醫藥有限公司定點采購，經湖南省中醫藥研究院李若存研究員鑒定，質量符合藥典要求。制備工藝: 三七、丹參、槐米用75%乙醇加熱回流提取2 次( 5 倍量，4倍量) ，每次提取1. 5 h，濾過，濾液減壓回收乙醇，并濃縮至密度為1. 30 ～ 1. 35( 60 ℃) 的清膏，備用; 積雪草加水煎煮2 次( 12 倍水，10 倍水) ，每次1. 5 h，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1. 10 ～ 1. 15 ( 60 ℃) 的清膏，加乙醇使含醇量達65%，攪勻，靜置24 h，濾過，濾液減壓回收乙醇，并濃縮至相對密度為1. 30～ 1. 35( 60 ℃) 的清膏，與上述清膏合并，真空干燥( 真空度0. 08 ～ 0. 09 MPa，溫度70 ～ 80 ℃) ，粉碎成細粉，臨用時取浸膏粉，加適量蒸餾水配制成所需濃度的懸濁液，批號: 20101024。三七傷藥膠囊，廣西玉林制藥有限責任公司，批號: 20120328; 吲哚美辛片，山西太原藥業有限公司，批號: 20100801; 硫化鈉，上海統亞化工科技發展有限公司，批號: 071220;注射用青霉素，哈藥集團制藥總廠生產，批號:A101203106; 烏拉坦，國藥集團化學試劑有限公司，批號: T20101026。
1. 3 主要儀器
BP1502 型電子天平，瑞士梅特勒-托利多公司; GJ-8402 型熱板測定儀，浙江海寧白石電子醫藥儀器廠。
2 方法
2. 1 促骨方對家兔實驗性骨折愈合的影響
2. 1. 1 動物分組、造模及給藥: 取新西蘭兔60 只，均靜脈注射40%烏拉坦2. 5 mL /kg 麻醉后，動物右腿剪毛，用碘酒及酒精消毒，在無菌條件下手術，用骨鋸造成家兔右前肢橈骨中段3 mm 完全缺損，術畢縫合傷口，給青霉素5 萬單位/只肌注，連續3 d，以預防感染〔1，2〕。隨機將家兔分成5 組，即模型組( 蒸餾水) 、三七傷藥膠囊( 0. 63 g /kg) 陽性對照組及促骨方低( 1. 428 g /kg ) 、中( 4. 284 g /kg ) 、高( 8. 568 g /kg) 劑量組，每組12 只，灌胃給藥，灌胃體積為5. 0 mL /kg，1 次/d，連續30 d。
2. 1. 2 局部皮膚腫脹程度檢測: 各組動物于手術前及手術后第1、3、5、7 天用細絲線繞創口正中測量右肢周長作為腫脹程度。
2. 1. 3 X 光檢查: 于手術后1、15、30 天，各組取動物拍攝雙側橈骨X 光片，拍攝條件為46 kV，100mA，28 mAs，60 cm。采用柴本甫，過邦輔方法評價，擬定四級骨折愈合標準: Ⅰ級: 骨缺損清晰存在，中間無骨組織影; Ⅱ級: 骨缺損兩端有骨質增生影，缺損中間有云霧影樣骨組織; Ⅲ級: 缺損中間有明顯骨痂組織填充，但仍可見缺損印痕; Ⅳ級: 缺損處已完全被骨組織影填充，缺損印痕難以辨認。以上4 級分別計1、2、3、4 分，計算并比較各組動物的平均積分。
2. 1. 4 光鏡組織病理學檢查: 各組動物于手術后30 d 評定骨痂組織愈合程度: Ⅰ級: 骨痂部位以纖維性骨痂為主; Ⅱ級: 骨痂具有大量的軟骨組織; Ⅲ級: 骨痂部位軟骨或骨小梁各約占50%; Ⅳ級: 骨痂部位以交織的骨小梁為主。以上4 級分別計1、2、3、4 分，計算并比較各組動物的平均積分。
2. 2 小鼠熱板試驗選痛閾值在5 ～ 30 s 的雌性小鼠50 只，按體質量隨機分為5 組，即對照組( 蒸餾水20 mL /kg) ，吲哚美辛( 0. 005 g /kg) 陽性對照組及促骨方低( 3. 98 g /kg ) 、中( 11. 94 g /kg ) 、高( 23. 88 g /kg) 劑量組，灌胃給藥，體積為20 mL /kg，1次/d，連續7 d。末次給藥后30、60、90 min 用熱板測痛儀測小鼠痛閾值。
2. 3 小鼠扭體試驗取小鼠50 只，按性別體質量隨機分為5 組，即對照組( 蒸餾水20 mL /kg) ，吲哚美辛( 0. 005 g /kg) 陽性對照組及促骨方低( 3. 98 g /kg) 、中( 11. 94 g /kg) 、高( 23. 88 g /kg) 劑量組，灌胃給藥，體積為20 mL /kg，1 次/d，連續7 d，末次給藥后1 h，每鼠腹腔注射0. 6%醋酸0. 2 mL，秒表計時，記錄20 min 內小鼠扭體潛伏期及扭體次數。
2. 4 統計學處理計量資料均采用珋x ± s 表示，組間比較采用方差分析，以P < 0. 05 為差異有統計學意義。
3 結果
3. 1 促骨方對家兔實驗性骨折愈合的影響
3. 1. 1 促骨方對實驗性骨折家兔局部軟組織腫脹的影響: 結果如表1 所示，與模型組比較，各給藥組在給藥后1、3、5 天對家兔骨折部位腫脹度顯著低于模型組( P < 0. 05 或P < 0. 01) 。
3. 1. 2 促骨方對實驗性骨折家兔損傷部位愈合的影響: 結果如表2 所示，治療第15 天，促骨方中、高劑量組及三七傷藥膠囊組X 光平均積分顯著高于模型組( P < 0. 05 或P < 0. 01) ; 治療第30 天，各給藥組X 光平均積分均顯著高于模型組( P < 0. 05 或P < 0. 01) 。
3. 1. 3 促骨方對實驗性骨折家兔骨痂組織愈合的影響:與模型組比較，促骨方高劑量和陽性藥對家兔骨折部位骨痂的形成和骨折的修復有明顯的促進作用( P < 0. 01，P < 0. 05) 。而促骨方中、低劑量的作用不明顯( P > 0. 05) 。
3. 2 熱板法檢測促骨方對小鼠痛閾的影響結果如表4 所示，與對照組比較，促骨方中、高劑量組及吲哚美辛組小鼠痛閾在30、60、90 min 時顯著升高( P < 0. 05 或P < 0. 01) 。
3. 3 促骨方對醋酸致小鼠扭體反應的影響結果如表5 所示，與對照組比較，各給藥組小鼠潛伏期均顯著延長( P < 0. 05 或P < 0. 01) ，扭體次數顯著減少( P < 0. 05 或P < 0. 01) 。
4 討論
中醫認為，外來暴力猛烈撞擊、重物挫壓、不慎跌倒、強力扭轉均可引起急性傷筋。受傷后，筋肉或損或斷，經脈絡脈隨之受傷，氣血互阻，血腫形成，引起疼痛、腫脹和功能障礙。四肢骨折的早期同樣存在軟組織損傷，瘀血阻滯是其主要的病理機制，故二者均表現為局部腫脹、疼痛、活動受限。治當以活血散瘀，消腫止痛，促進損傷組織愈合為法則。本實驗結果表明，連續口服促骨方30 d，對實驗性骨折家兔早期局部軟組織腫脹有明顯的消腫作用，X 光檢查和病理檢查證明，分別在15、30 d 均能促進家兔骨折部位骨痂的生長和愈合。還能提高熱板法致痛小鼠的痛閾，延長醋酸致痛小鼠發生扭體反應的潛伏期及減少小鼠扭體次數，有明顯的促進骨折愈合和鎮痛作用，為促骨方臨床應用提供了實驗依據。
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