論免疫金標記技術的發展

　　免疫膠金標記技術的發展已不僅僅局限在其作為示蹤標志物的功能方面，已有關于放大檢測信號方法研究的報道。生物素?親和素系統應用于免疫金標記技術，帶正電荷的鏈霉親和素標記在帶負電荷的膠體金顆粒上，又能與生物素緊密結合，使檢測信號在只有膠體金標記的基礎上得到擴大[14]。Hou等[15]利用縮氨酸與硝酸纖維素膜的相互作用固定生物素抗體于膜上，并分別采用有無銀增強金標記技術檢測生物素化縮氨酸，無銀增強檢出限為100 amol/mL，銀增強金標記檢出限可達100 zmol/mL。Tanaka等[16]將一抗也標記上膠體金，作為信號增強子從而提高檢測的靈敏度，可檢測到人血清中10 pg/mL HCG，達到了ELISA方法檢測的靈敏度。Ambrosi等[17]采用雙標記方法將酶標二抗標記在膠體金上，一個15 nm的膠體金顆粒上可以標記約10個酶標二抗分子，其檢測靈敏度比常規ELISA方法更高。

　　抗原（Antigen）； 銀顆粒（Silver nanoparticle）； 金顆粒（Gold nanoparticle）； 抗體（Antibody）。近年來，免疫膠體金標記技術得到了不斷地發展和改進，微波（MW）技術開始應用其中。Galvez等[13]在不改變其它實驗條件的情況下采用微波技術進行標記，使標記過程中固定時間至少縮短20 min。 兩種技術的結合使標記效果更好，背景清晰，而且縮短染色時間。同時增加反應強度后較常規方法所需抗體濃度低，可節約價格昂貴的一抗。

　　Nam等[18]在免疫金標記技術的基礎上發展了BCA（Ｂio?barcode amplification）擴增技術，金顆粒表面修飾了起信號放大作用的條形碼DNA和針對待測蛋白的抗體，磁微粒表面則修飾待測蛋白的另一種單克隆抗體。兩者與待測蛋白形成復合結構，復合物經過磁場分離，金顆粒受熱變性釋放條形碼DNA，通過對其進行無PCR或PCR檢測，間接檢測目標蛋白，檢出限分別達30和3 amol。經過多次信號放大技術，克服了對酶促反應的依賴，檢測靈敏度比ELISA高103～106倍，并可同時檢測多個蛋白[19]。鐘曉琴等[20]在BCA方法的基礎上，將膠體金免疫標記技術與酶免疫標記技術有效地結合起來，制備酶標金探針。其靈敏度高且步驟簡單，只需普通光學儀器即可檢測蛋白質。通過對免疫金標記技術研究工作的不斷深入，必將使該技術的使用效果更佳，應用于更多的研究領域。

　　免疫層析法（Immunochromatography）是20世紀90年代興起的一種快速診斷技術，膠體金免疫層析技術（GICA）就是利用膠體金本身的顯色特點結合免疫層析技術診斷特異性的待測物而發展起來的。這項技術既可采用雙抗體夾心法測抗原，又可用間接法、競爭法測抗體。在該技術基礎上研制的膠體金免疫層析試紙條、試劑盒操作起來方便快捷，應用前景廣闊。

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