生物實驗報告15篇[集合]
隨著個人的文明素養不斷提升,越來越多人會去使用報告,我們在寫報告的時候要避免篇幅過長。其實寫報告并沒有想象中那么難,以下是小編為大家收集的生物實驗報告,希望對大家有所幫助。
![生物實驗報告15篇[集合]](/pic/00/c9faceef07_5fbf7f3b53ba8.jpg)
生物實驗報告1
為了加強我院醫院病原微生物實驗室的生物安全管理工作,確保實現醫院的安全目標,我院檢驗科根據xxxx省《病原微生物實驗室生物安全管理條例》的相關規定,對醫院實驗室的安全管理工作進行了自查。我們還針對涉及病原微生物菌(毒)種及樣本的人員進行了培訓,提高他們的生物安全意識,并確保他們掌握必要的生物安全知識。
一、實驗室生物安全管理工作、各項規章制度的運行情況
醫院檢驗科注重學習和遵守《病原微生物實驗室生物安全管理條例》,并定期對生物安全各項規章制度的運行情況進行檢查和整改。實驗室嚴格遵守國家標準、實驗室技術規范和操作規程,并指派專人監督檢查其落實情況。同時,詳細記錄檢查情況,并定期召開會議討論發現的問題,并及時糾正。
二、病原微生物菌(毒)種的管理及運輸
由于目前我院的相關條件存在限制,暫時無法開展病原微生物實驗室生物的檢查。為了滿足通知要求,我們積極組織相關人員學習了以下內容:嚴格管理病原微生物實驗室菌(毒)種的登記制度,一旦收到菌(毒)種后立即進行編號登記,并詳細記錄菌(毒)種的名稱、來源、特性、用途、批號、傳代日期和數量。在菌(毒)種的管理過程中,包括安全保衛制度、安全保衛措施和保管過程中的傳代、分發和使用,都需要及時進行登記,同時定期核對庫存數量。在銷毀菌(毒)種時,還需進行滅菌指示標志和滅菌效果的登記,并做好銷毀過程的記錄。
三、實驗室生物安全突發事件的處理工作
在本次自我檢查中,我們實驗室對之前制定的應急指揮和處置體系進行了修訂,以更好地滿足實際工作的需求。
當遭遇自然災害(例如地震、水災等)或設施故障時,我們制定了針對可能出現的緊急情況的處理原則和應對措施。
同時規范了菌(毒)種外溢在臺面、地面和其他表面的'的處理原則、皮膚刺傷(破損)的處理原則、離心管發生破裂的處理原則并建立了意外事故報告制度。
我們在實驗室的醒目位置貼出了一份聯系電話列表,方便大家隨時獲取相關部門的聯系方式。這份列表包括實驗負責人、實驗室工作人員、消防部門、醫院、公安機關、工程技術人員、以及水、電氣維修部門的電話號碼。
四、提高意識,加強學習
組織檢驗人員對《病原微生物實驗室生物安全管理條例》進行全面系統的學習,同時加強了實驗室的準入制度的管理,標明實驗室類型、負責人及其聯絡方式。加強了個人安全防護。
經過此次對微生物實驗室生物安全管理工作的自查,我們全體檢驗人員對該工作的重要性有了更深刻的認識。為加強管理,確保實驗室工作的安全,我們采取了有效措施。
生物實驗報告2
一、實驗目的
1.初步學會探索酶催化特定化學反應的方法。
2.探索淀粉酶是否只能催化特定的化學反應。
二、實驗原理
淀粉和蔗糖都是非還原糖,它們在酶的催化作用下都能水解成還原糖,還原糖能夠與斐林試劑發生氧化還原反應,生成磚紅色的'氧化亞銅沉淀。
用淀粉酶分別催化淀粉溶液和蔗糖溶液,再用斐林試劑鑒定溶液中有無還原糖,就可以看出淀粉酶是否能催化這兩種化學反應。
三、材料用具
滴管、試管、火柴、試管架、溫度計、三腳架、石棉網、酒精燈、燒杯、質量分數為2%的新鮮淀粉酶溶液、質量分數為3%的可溶性淀粉溶液、質量分數為3%的蔗糖溶液、斐林試劑
四、實驗過程
(見書P47)
五、討論
1.制備的可溶性淀粉溶液,必須完全冷卻后才能使用。為什么?
2.兩支試管保溫時,為什么要控制在60℃左右(低于50℃或高于75℃)?
3.如果2號試管也產生了磚紅色沉淀,可能是由哪些原因造成的?
生物實驗報告3
一、實驗目的
初步掌握鑒定生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質的基本方法。
二、實驗原理
1、還原糖的鑒定原理
生物組織中普遍存在的還原糖種類較多,常見的有葡萄糖、果糖、麥芽糖。它們的分子內都含有還原性基團(游離醛基或游離酮基),因此叫做還原糖。蔗糖的分子內沒有游離的半縮醛羥基,因此叫做非還原性糖,不具有還原性。本實驗中,用斐林試劑只能檢驗生物組織中還原糖存在與否,而不能鑒定非還原性糖。
斐林試劑由質量濃度為0.1 g/mL的氫氧化鈉溶液和質量濃度為0.05 g/mL的硫酸銅溶液配制而成,二者混合后,立即生成淡藍色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2與加入的葡萄糖在加熱的條件下,能夠生成磚紅色的Cu2O沉淀,而葡萄糖本身則氧化成葡萄糖酸。其反應式如下:
CH2OH—(CHOH)4—CHO+2Cu(OH)2→CH2OH—(CHOH)4—COOH+Cu2O↓+2H2O
用斐林試劑鑒定還原糖時,溶液的顏色變化過程為:淺藍色棕色磚紅色(沉淀)。
2、蛋白質的鑒定原理
鑒定生物組織中是否含有蛋白質時,常用雙縮脲法,使用的是雙縮脲試劑。雙縮脲試劑的成分是質量濃度為0.1 g/mL的氫氧化鈉溶液(A)和質量濃度為0.01 g/mL(B)的`硫酸銅溶液。在堿性溶液(NaOH)中,雙縮脲(H2NOC—NH—CONH2)能與Cu2+作用,形成紫色或紫紅色的絡合物,這個反應叫做雙縮脲反應。由于蛋白質分子中含有很多與雙縮脲結構相似的肽鍵,因此,蛋白質可與雙縮脲試劑發生顏色反應。
3、脂肪的鑒定原理
脂肪可以被蘇丹Ⅲ染成橘黃色,被蘇丹Ⅳ染成紅色
三、實驗過程(見書P18)
四、實驗用品(見書P18)
五、注意
1、關于鑒定還原糖的實驗,在加熱試管中的溶液時,應該用試管夾夾住試管上部,并放入盛開水的大燒杯中加熱。注意試管底部不要接觸燒杯底部,同時試管口不要朝向實驗者,以免試管內溶液沸騰時沖出試管,造成燙傷。如果試管內溶液過于沸騰,可以上提試管夾,使試管底部離開大燒杯中的開水。
2、斐林試劑的甲液和乙液混合均勻后方可使用,切勿將甲液和乙液分別加入組織樣液中。
3、蛋白質的鑒定中先加雙縮脲A,再加雙縮脲B
六、討論
鑒定生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質的根據是什么?
生物實驗報告4
醫學生物學是中醫院校的基礎課程,是一門實踐性很強的學科。實驗教學是醫學生物學教學過程中重要的組成部分,實驗教學效果的好壞直接影響課堂教學的效果和學生對醫學生物學的興趣。高年制的醫學生是各醫學院校重點培養的高層次醫學人才,因此,對他們的要求遠遠高于五年制學生,除了要求他們掌握全面扎實的專業知識外,還要求他們具有較高的科研素質、創新能力和實踐能力,進而全面提高高年制學生的綜合素質,培養學生分析問題、解決問題的能力。基于此,實驗教學改革成為我們教學的重點。筆者綜合分析目前我室的生物學實驗教學過程,除了基本的醫學生物學實驗外,還開設了現代生物學實驗技術課,這門實驗課主要包括細胞培養、細胞傳代和染色體顯帶等實驗;在進行觀察體外培養細胞的基本形態這個實驗時,對該實驗進行幾個方面的改革,主要包括對實驗教學方法、實驗內容設計和實驗具體操作進行改進,經調查,改革后實驗教學效果較好。
一、實驗教學方法改革
觀察體外培養細胞的基本形態這個生物學實驗的目的有兩個:
一是掌握倒置顯微鏡的使用方法;
二是讓學生了解細胞的基本形態結構和體外培養細胞的生長狀況。
這樣,有助于學生理解細胞是生命有機體的基本結構單位。針對這個實驗目的,我們采用多媒體教學和國內外文獻教學相結合,從體外培養細胞的形態特征類型開始講解,結合不同細胞的圖片,逐步講解。同時,結合實物演示(培養瓶中裝有不同時間的培養細胞)給學生講解體外培養細胞的生長狀況和細胞培養中的污染情況,使學生對這個實驗先有感官認識,然后讓學生自己設計實驗。
二、實驗內容設計
在實驗內容設計過程中,我們首先對實驗室的實驗條件和經費進行考慮,然后結合高年制學生的實際條件進行實驗設計。我校高年制的學生在進行現代生物學實驗技術學習時,已經完成了基本的醫學生物學實驗,如顯微鏡的觀察、蟾蜍的解剖等基本實驗,所以,在進行現代生物學實驗技術時已經具備了一定的知識水平。高年制的學生分兩組進行這個實驗,每組為21人,結合我室的實驗條件,倒置顯微鏡只有一臺,要完成這個實驗而且效果要好必須進行以下的實驗設計:
(1)細胞的準備:培養瓶細胞的準備和24孔板細胞的準備。
(2)蓋玻片的無菌準備。
(3)細胞固定試劑的選擇。
(4)顯微互動實驗室進行固定細胞的觀察;倒置顯微鏡進行培養瓶細胞的觀察。
(5)進行實驗結果的分析、討論。
三、具體操作步驟的改進
實驗內容設計好以后,進行具體的操作步驟:
(1)將21個學生分為7組,每3人1組。
(2)以往實驗是利用培養瓶培養細胞,但是只有一臺倒置顯微鏡,所以改為24孔板內放置蓋玻片培養細胞。
(3)每組進行培養細胞前準備。首先各組進行蓋玻片的無菌處理,然后將無菌的`蓋玻片放入24孔板內。
(4)各組進行24孔板內細胞接種培養,即爬片。
(5)將有細胞的蓋玻片取出,各組進行固定。
(6)第一組、第二組采用丙酮固定;第三組、第四組采用95%乙醇固定;第五組、第六組采用甲醛固定;第七組采用甲醇冰醋酸固定。
(7)在顯微互動實驗室進行細胞形態的觀察。
(8)交叉進行倒置顯微鏡下觀察培養瓶內的細胞。實驗完成后進行實驗報告的書寫,內容包括實驗原理、實驗目的、實驗設計及實驗結果的討論等。學生將固定的細胞和未固定細胞的形態觀察進行討論分析,討論的過程較熱烈,有的學生提出的問題特別有意義,這樣既可以讓每個學生參與實驗,同時,又增強了同學提出問題、解決問題的能力。
針對觀察體外培養細胞的基本形態這個實驗,我們進行了以上這幾個方面的改進,使學生在教學過程中的各個環節都主動參與并不斷地提出新的問題。在這個過程中,學生得到鍛煉的同時,教師也在教學中得到了學習,擴展了知識面。實驗教學是樹立學生實踐觀念,培養分析、解決實際問題能力,啟迪學生創新思維,提高學生綜合素質的重要環節。所以,在實驗教學過程中,我們要不斷地進行探索和改革,這樣更有利于培養學生的新能力和科研素質。
生物實驗報告5
一、實驗目的
1.初步學會探索酶的催化效率的方法。
2.探索過氧化氫酶和Fe3+催化效率的高低。
二、實驗原理
新鮮的'豬肝中含有過氧化氫酶,Fe3+是一種無機催化劑,它們都可以催化過氧化氫分解
成水和氧
三、材料用具
質量分數為20%的新鮮豬肝漿、滴管、試管、火柴、試管架、質量分數為3.5%的氯化鐵溶液、體積分數為3%的過氧化氫溶液。
四、實驗過程(見書P30)
五、討論
實驗中選擇新鮮的豬肝是因為新鮮的豬肝中的酶活性較高,能夠更有效地催化反應。另外,新鮮的豬肝也能保證實驗結果的可靠性和準確性。在滴入豬肝研磨液和氯化鐵溶液時,不可以公用一個吸管。這是因為兩種液體中可能含有不同的物質,通過公用一個吸管會導致交叉污染,影響實驗結果的準確性和可靠性。
生物實驗報告6
年級班實驗人:組次:試驗時間:
一、探究目的
1、通過觀察酒精或煙草浸出液對水蚤心率的影響,知道酗酒和吸煙對人體健康的.危害。
2、知道生活方式和飲食習慣對人類健康的影響。
二、探究步驟
1、發現并提出問題:______________________________________ 。
2、作出假設:___________________________________________________ 。
3、制定計劃:
4、實施計劃:認真記錄和分析探究的過程和結果和。
5、得出結論:_________________________________________________________ 。
6、表達交流。
三、討論
1、酒精或煙草浸出液對水蚤心率有什么影響?怎樣解釋這種現象?
2、酗酒和吸煙對人體健康可能有哪些危害?
3、影響人們健康的因素有哪些?
生物實驗報告7
一、實驗目的
1、學會提取和分離葉綠體中色素的方法。
2、比較、觀察葉綠體中四種色素:理解它們的特點及與光合作用的關系
二、實驗原理
光合色素主要存在于高等植物葉綠體的基粒片層上,而葉綠體中的色素能溶于有機溶劑中。故要提取色素,要破壞細胞結構,破壞葉綠體膜,使基粒片層結構直接與有機溶劑接觸,使色素溶解在有機溶劑中。葉綠體中的色素有四種,不同色素在層析液(脂溶性強的有機溶劑)中的'溶解度不同,因而隨層析液的擴散速度也不同。
三、材料用具
取新鮮的綠色葉片、定性濾紙、燒杯、研缽、漏斗、紗布、剪刀、小試管、培養皿、毛細吸管、量筒、有機溶劑、層析液(20份石油醚、2份丙酮、1份苯混合)、二氧化硅、碳酸鈣。
四、實驗過程(見書P54)
1、提取色素:xxxx。
2、制備濾紙條:xxxx。
3、色素分離,紙層析法。(不要讓濾液細線觸及層析液)
4、觀察:層析后,取出濾紙,在通風處吹干。觀察濾紙條上出現色素帶的數目、顏色、位置和寬窄。結果是:4條色素帶從上而下依次是:胡蘿卜素(橙黃色)、葉黃素(黃色)、葉綠素a(藍綠色)、葉綠素b(黃綠色)。
五、討論
1、濾紙條上的濾液細線為什么不能接觸到層析液?
2、提取和分離葉綠體中色素的關鍵是什么?
六、結論
略
生物實驗報告8
實驗名稱:
用高倍顯微鏡觀察葉綠體和細胞質流動
一、實驗目的
1.初步掌握高倍顯微鏡的使用方法。
2.觀察高等植物的葉綠體在細胞質基質中的形態和分布
二、實驗原理
高等植物的葉綠體呈橢球狀,在不同的光照條件下,葉綠體可以運動,改變橢球體的方向,這樣既能接受較多的光照,又不至于被強光灼傷。在強光下,葉綠體以其橢球體的側面朝向光源;在弱光下,葉綠體以其橢球體的正面朝向光源。因此,在不同光照條件下采集的葫蘆蘚,其小葉內葉綠體橢球體的形狀不完全一樣。活細胞中的`細胞質處于不斷的流動狀態,觀察細胞質的流動,可以用細胞質基質中的葉綠體的運動做為標志。
三、材料用具
蘚類的葉,新鮮的黑藻,顯微鏡,載玻片,蓋玻片,滴管,鑷子,刀片,培養皿,鉛筆
四、實驗過程(見書P30)
1.制作蘚類葉片的臨時裝片
2.用顯微鏡觀察葉綠體
3.制作黑藻葉片臨時裝片
4.用顯微鏡觀察細胞質流動
物理實驗報告 ·化學實驗報告 ·生物實驗報告 ·實驗報告格式 ·實驗報告模板
五、討論
1.細胞質基質中的葉綠體是否靜止不動,為什么?
2.葉綠體的形態和分布與葉綠體的功能有什么關系?
3.植物細胞的細胞質處于不斷的流動狀態,這對于活細胞完成生命活動有什么意義?
4.用鉛筆畫一個葉片細胞,標出葉綠體的大致流動方向。
生物實驗報告9
一、實驗目的
1. 初步學會觀察植物細胞質壁分離和復原的方法。
2. 理解植物細胞發生滲透作用的原理。
二、實驗原理
當細胞液的'濃度低于外界溶液的濃度時,水分會通過原生質層進入外界溶液中,導致細胞壁和原生質層發生收縮。因為原生質層的收縮性大于細胞壁,隨著細胞不斷失水,原生質層逐漸與細胞壁分離,即發生了質壁分離。相反,當細胞液的濃度高于外界溶液的濃度時,外界溶液中的水分會通過原生質層進入細胞液中,原生質層會逐漸恢復到原來的狀態,從而使植物細胞逐漸發生質壁分離復原。
三、材料用具
紫色洋蔥鱗片葉、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、滴管、鑷子、刀片、吸水紙、清水、0.3g/ml蔗糖溶液
四、實驗過程(見書P60)
五、討論
1. 如果把洋蔥表皮細胞浸泡在與細胞液等滲的蔗糖溶液中,這些細胞會發生質壁分離現象。
2.當紅細胞細胞膜兩側的溶液具有濃度差時,紅細胞會不會發生質壁分離現象?為什么?
3.繪制一組模式圖,描述一個細胞在正常狀態下,經過處理后的變化。首先將細胞放入0.3g/ml蔗糖溶液中處理,然后再經過清水處理。
生物實驗報告10
質粒DNA的提取、純化及檢測
姓名:XXX學號:2011001400XX年級:20xx級生物基地班 實驗日期:20xx年9月16日—30日組別:6組 同組者:XX
一、【實驗目的】
1、掌握堿變性提取法提取大腸桿菌中質粒DNA的原理和方法。
2、學習并掌握凝膠電泳進行DNA的分離純化的實驗原理。
3、學習并掌握凝膠的制備及電泳方法。
4、學習并掌握凝膠中DNA的分離純化方法。
二、【實驗原理】
1、質粒DNA的制備方法
質粒(Plasmid)是獨立存在于染色體外、能自主復制并能穩定遺傳的一種環狀雙鏈DNA分子,分布于細菌、放線菌、真菌以及一些動植物細胞中,但在細菌細胞中含量最多。細菌質粒大小介于1~200Kb之間,是應用最多的質粒類群,在細菌細胞內它們利用宿主細胞的復制機構合成質粒自身的DNA。
質粒DNA的制備包括3個步驟:①培養細菌,使質粒DNA大量擴增;②收集和裂解細菌;③分離和純化質粒DNA。主要方法包括:堿裂解法:0。2molNaOH+1%SDS;煮沸裂解法:沸水煮沸40秒;SDS裂解法:10%SDS,一般用于質粒大量提取。在實際操作中可以根據宿主菌株類型、質粒分子大小、堿基組成和結構等特點以及質粒DNA的用途進行選擇。本實驗選擇堿裂解法提取質粒DNA。
2、質粒DNA的提取——堿變性提取法
在細菌細胞中,染色體DNA和質粒DNA均被釋放出來,但是兩者變性與復性所依賴的溶pH值不同。在pH值高達12。0的堿性溶液中,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結構解開而變性;共價閉合環狀質粒DNA的大部分氫鍵斷裂,但兩條互補鏈不完全分離。因為它們在拓撲學上是相互纏繞的。當用pH值4。6的KAc(NaAc)高鹽溶液調節堿性溶液至中性時,變性的質粒DNA可恢復原來的共價閉合環狀超螺旋結構而溶解于溶液中;但染色體DNA不能復性,而是與不穩定的大分子RNA、蛋白質—SDS復合物等一起形成纏連的、可見的白色絮狀沉淀。這種沉淀通過離心,與復性的溶于溶液的質粒DNA分離。溶于上清液的質粒DNA,可用無水乙醇和鹽溶液,使之凝聚而形成沉淀。由于DNA和RNA性質類似,乙醇沉淀
DNA的同時,也伴隨著RNA沉淀,可利用RNaseA將RNA降解。質粒DNA溶液中的RNaseA以及一些可溶性蛋白,可通過酚/氯仿抽提除去,最后獲得純度較高的質粒DNA。
3、凝膠電泳進行DNA分離純化
電泳(electrophoresis)是帶電物質在電場中向著與其電荷相反的電極方向移動的現象。各種生物大分子在一定pH條件下,可以解離成帶電荷的離子,在電場中會向相反的電極移動。凝膠是支持電泳介質,它具有分子篩效應。含有電解液的凝膠在電場中,其中的電離子會發生移動,移動的速度可因電離子的大小形態及電荷量的不同而有差異。利用移動速度差異,就可以區別各種大小不同的分子。因而,凝膠電泳可用于分離、鑒定和純化DNA的片段,是分子生物學的核心技術之一。
凝膠電泳技術操作簡單而迅速,分辨率高,分辨范圍廣。此外,凝膠中DNA的位置可以用低濃度熒光插入染料如溴化乙錠(ethidium bromide,EB)或SYBR Gold染色直接觀察到,甚至含量少至20pg的雙鏈DNA在紫外激發下也能直接檢測到。需要的話,這些分離的DNA條帶可以從凝膠中回收,用于各種各樣目的的實驗。
分子生物學中,常用的兩種凝膠為瓊脂糖(agarose)和聚丙烯酰胺凝膠。這兩種凝膠能灌制成各種形狀、大小和孔徑,也能以許多不同的構型和方位進行電泳。聚丙烯酰胺凝膠分辨率高,使用于較小分子核酸(5—500bp)的分離和蛋白質電泳。它的分辨率非常高,長度上相差1bp或質量上相差0。1%的DNA都可以彼此分離,這也是采用聚丙烯酰胺凝膠電泳進行DNA序列分析的分子基礎。雖然它能很快地進行電泳,并能容納較大的DNA上樣量,但是與瓊脂糖凝膠相比,在制備和操作上繁瑣。瓊脂糖是從海藻中提取的長鏈狀多聚物,由β—D—吡喃半乳糖與3,6—脫水—L—吡喃半乳糖組成,相對分子質量為104—105。瓊脂糖加熱至90℃左右,即可溶化形成清亮、透明的液體,澆在模版上冷卻后形成凝膠,其凝固點為40—45℃。瓊脂糖凝膠相對于聚丙烯酰胺凝膠分辨率低,但它的分離范圍更大(50至百萬bp),小片段DNA(50—20000bp)最適合在恒定輕度和方向的'電場中水平方向的瓊脂糖凝膠內電泳分離。瓊脂糖凝膠電泳易于操作,適用于核酸電泳,測定DNA的相對分子質量,分離經限制酶水解的DNA的片段,進一步純化DNA等。
瓊脂糖凝膠電泳是一種常用的方法。在溶液中,由于核酸有磷酸基而帶有負電荷,在電場中向正極移動。DNA在瓊脂糖凝膠中的電泳遷移率主要取決于6個因素:樣品DNA分子的大小、DNA分子的構象、瓊脂糖濃度、電泳所用電場、緩沖液和溫度。
三、【實驗材料】
1、實驗儀器
培養皿、接種環、三角瓶、酒精燈、恒溫振蕩培養箱、50ml離心管、1。5ml塑料離心管(Eppendorf管)、高速離心機、漩渦振蕩器、微量移液器、不同型號槍頭、天平、制膠槽、梳子、電泳儀、吸管、量筒、微波爐、滅菌鍋、恒溫水浴鍋、試劑瓶、衛生紙和記號筆、手套等。
2、實驗試劑
LB培養基,抗生素Ap(氨芐青霉素),溶液Ⅰ,溶液Ⅱ,溶液Ⅲ,RNaseA母液,TE緩沖液,飽和酚,氯仿/異戊醇混合液,酚/氯仿/異戊醇(PCI)混合液,預冷無水乙醇,TAE電泳緩沖液(10×),上樣緩沖液(6×),瓊脂糖,溴化乙錠(EB),DNA相對分子質量標準物DNA Marker λ/Hind Ⅲ,5mol/L pH 5。2的醋酸鈉。
四、【實驗步驟】
1、準備實驗
配制LB液體培養基,分裝到100ml的三角瓶中20ml,300ml的三角瓶中50ml,另配LB固體培養基;準備1000ul、200ul、10ul移液槍尖各一盒,1。5ml離心管若干于500ml三角瓶中,50ml離心管2個 ,將上述物品包好連同配好的培養基一同滅菌。
2、菌體培養
在含有Ap的LB平板上挑取一環攜帶有質粒pUC19的E。coli DH5單菌落,接種于20mlLB液體培養基中進行37℃振蕩過夜培養,培養基中加Ap100ul
(100ug/ml),質粒pUC19具有Ap抗性基因,使得帶有pUC19的質粒得以生長。 過夜培養后菌體量大,雜質較多,然后用移液槍吸取過夜培養物2ml轉接于50mlLB液體培養基中,培養基中加入Ap250ul,37℃振蕩培養4—6h至對數生長期后期,生長速率快,代謝旺盛,酶系活躍,雜質少,適合提取質粒。
3、質粒提取
(1)稱量空的50ml離心管的重量為14。331g,然后將三角瓶中的菌液倒至管中,不能倒滿,液面距管口約1cm,7000rpm離心5分鐘后棄去上清液,收集菌體細胞。
(2)向離心管中懸滴加入5ml冰預冷的溶液Ⅰ打散菌體洗滌,用漩渦振蕩器使之充分懸浮后用槍尖吹吸混勻,同步驟(1)離心,棄去上清,將離心管倒置于吸水紙上,使上清液全部流盡干燥,然后稱重得14。437g,則菌體質量為106mg。
(3)洗滌后每100mg菌體應加入冰預冷的溶液Ⅰ1ml,106mg菌體按100mg菌體處理,加入溶液Ⅰ1ml,打散菌泥、吹吸混勻,冰浴5min。溶液Ⅰ中的葡萄糖使
溶液密度增加,懸浮后的大腸桿菌不會快速沉積到管子的底部;維持滲透壓,防止細胞提前破裂,防止DNA受機械剪切力作用而降解。EDTA是Ca2+和Mg2+等二價金屬離子的螯合劑,可抑制DNase的活性,抑制微生物的生長。Tris—Cl溶液提供適當的pH。
(4) 按比例加入新配制的溶液Ⅱ2ml(與溶液Ⅰ對應),輕加輕搖,冰浴5min。溶液變清亮透明粘稠如蛋清狀。溶液Ⅱ中的NaOH使細胞膜發生了從bilayer(雙層膜)結構向micelle(微囊)結構的相變化導致細胞溶解。同時,強堿性使染色體DNA、質粒DNA和蛋白質變性;SDS為下一步沉淀做鋪墊。
(5)按比例加入冰預冷的溶液Ⅲ1。5ml(與溶液Ⅰ、Ⅱ對應),輕加輕搖,冰浴10min。溶液出現白色絮狀沉淀。沉淀為蛋白質SDS復合物、細胞碎片和其他大分子成分。溶液Ⅲ中的HAc中和NaOH,因為長時間的堿性條件會打斷基因組DNA,只要是50-100 kb大小的片斷,就不能再被PDS共沉淀。同時變性的質粒DNA復性。反應形成的高鹽環境進一步加速了沉淀。
(6)12000rpm離心15min,白色沉淀聚集在離心管一側,用移液槍將上清液轉移到另一潔凈的離心管中。然后向上清液中加入1/10體積的3MNaAc混勻,加入2倍體積的冰無水乙醇,混勻,—20℃下沉降30分鐘。乙醇可以任意比和水相混溶,乙醇與核酸不會起任何化學反應,對DNA很安全,因此是理想的沉淀劑。 DNA溶液是DNA以水合狀態穩定存在,當加入乙醇時,乙醇會奪去DNA周圍的水分子,使DNA失水而易于聚合。在pH為8左右的溶液中,DNA分子是帶負電荷的,加一定濃度的NaAc或NaCl,易于互相聚合而形成DNA鈉鹽沉淀。
(7) 以12000rpm離心15min,小心倒去上清液,得到DNA沉淀。加入3ml70%冰乙醇,輕輕地覆蓋沉淀,不打散沉淀,洗滌一次。
(8)以12000rpm離心5min,離心管底部DNA沉淀所在面應與收集沉淀面一致。去掉上清液,將離心管上沉淀部位做好標記,將離心管倒置于吸水紙上,干燥5min。粗提取的質粒呈淺黃色,隨著水分的減少質粒變為無色。所以為了完全溶解質粒,要在離心管上標記質粒所在位置。
(9)將DNA沉淀溶于1mlTE緩沖液中,移液槍吹吸助溶,然后將溶解液轉移到一個Eppendorf管中。TE是pH緩沖液,為DNA提供穩定的生理狀態,呈弱堿性,有利于保護堿基對。同時含有EDTA是二價陽離子的螯合劑,抑制DNA酶作用。
4、質粒純化
(1)Eppendorf管中加入RNase A(純濃度>50ug/ml),37℃保溫0。5—1h
(2)將上述的溶液平均分配到2個1。5ml的微量離心管中,每管0。5ml,分別加入與溶液等體積的(500ul)Tris飽和苯酚溶液,振蕩混勻,7000rpm,離心5min,上清液轉移到一潔凈的Eppendorf管中。苯酚是經Tris飽和后的,顯黃色。苯
酚加入后,溶液分層,苯酚向下,下層呈淺黃色,上層溶液無色,在中間產生大量白色沉淀,此為變性后的蛋白質。
(3)加入等體積的(500ul)苯酚/氯仿溶液(1:1),振蕩混勻, 7000rpm,離心5min,上清液轉移到到另一潔凈的Eppendorf管中。苯酚是強的蛋白變性劑,但是苯酚留在質粒溶液中會影響DNA的酶切,它本身易被氧化,會損傷質粒。氯仿也是蛋白變性劑,但是比酚弱,且能溶解質粒中的脂類,溶解苯酚,去除溶液中的苯酚。異戊醇則可起消除抽提過程中出現的泡沫,有利于分層更明顯。此時溶液中已看不到明顯的白色沉淀,但仍有蛋白質的存在。
(4)加入等體積的氯仿溶液,振蕩混勻, 7000rpm,離心5min,上清液轉移到一潔凈的Eppendorf管中,得上清液400ul。
(5)向上清液中加入1/10體積的NaAc混勻,再加入2倍體積的冰無水乙醇,混勻,—20℃下沉降30分鐘。
(6)以12000rpm,離心15min,棄去上清液,得到DNA沉淀,為白色。
(7)向DNA沉淀中加入70%冰乙醇200ul,不打散沉淀,洗滌。然后以12000rpm離心5min,離心管底部DNA沉淀所在面應與收集沉淀面一致。
(8)去掉上清液,將離心管倒置于吸水紙上,室溫干燥。用50ulTE溶解于1管中。
5、質粒檢測
(1)稱取0。4g的瓊脂糖,置于一錐形瓶中,在三角瓶上標好液面位置,加入40ml的1×TAE電泳緩沖液,再加入5—10ml重蒸水,以補充在溶膠過程中損失的水分。然后置微波爐加熱至完全溶化,溶液透明。冷卻至50℃左右,倒入制板槽制板。
(2)待膠凝固后,小心拔起梳子,使加樣孔端置陰極段放進電泳槽內。在槽內加入1×TAE 電泳緩沖液,至液面覆蓋過膠面2—3cm。取1μl加電泳載樣液和3μl質粒樣品于小紙片上,用移液槍混勻。
(3)電泳1h,觀察溴酚蘭的帶(藍色)的移動。
(4) 把膠槽取出,小心滑出膠塊,放進EB溶液中進行染色,完全浸泡約5min。
(5)凝膠成像儀觀察。
五、【注意事項】
(1)滴加溶液II時,要逐滴加入,且要輕加輕搖溶液使之混勻,整體動作要快,因為強堿在溶液中停留時間不能過長,否則會破壞質粒DNA。
(2)加入溶液III后,生成了大量的絮狀沉淀,溶液III中和強堿使質粒復性,不可劇烈震蕩, 防止染色體DNA斷裂,應該上下顛倒離心管,使其混勻。
生物實驗報告11
骨髓檢驗報告的書寫是檢驗專業學生《血液學檢驗》課程中非常重要的內容之一,在常見貧血、白血病等血液病的診斷、協助診斷和療效觀察過程中,臨床醫師需要反復抽取患者的骨髓送血液科進行骨髓檢查,每次檢查后檢驗醫師都要填寫骨髓檢驗報告,供臨床醫師診斷疾病,觀察療效,直到患者病情完全緩解出院為止。因此,骨髓檢驗報告單的填寫質量要求非常高,一份良好的骨髓檢驗報告單是骨髓細胞特征的全部再現,是檢驗醫師骨髓檢驗技術和對臨床資料綜合分析能力的高度體現,檢驗醫師不僅需要較強的識別骨髓細胞形態的能力,寫一份合格的骨髓檢驗報告更重要。學生在學習過程中,對骨髓檢驗報告的書寫常感到非常困難,為了上好這一課,筆者在多年的教學過程中,積極探索,結合學生實際與臨床實際,對骨髓檢驗報告單的書寫探索出了一套較好的教學方法,能使學生在較短的教學時間里寫好一份骨髓檢驗報告,并讓學生通過骨髓檢驗報告單的書寫,全面熟悉、掌握貧血及白血病等常見血液病的血象及骨髓象特征,學會分析骨髓象,掌握相關骨髓檢驗技術,并正確為常見血液病下診斷。現將教學方法交流如下。
1.總結出一套骨髓檢驗報告基本書寫模板,要求學生根據所檢驗的血液病的血象和骨髓象特征,按照模板認真填寫
根據教材及臨床實際,骨髓檢驗報告單的書寫具有一定規律,但對初學者學生來說,要寫好一份骨髓檢驗報告單確是一件非常困難的事,為了讓學生在課時數少的情況下盡快掌握書寫技巧,筆者為學生總結出了一套骨髓檢驗報告單書寫基本模板,供學生參考,要求學生按照模板要求認真分析骨髓象,填寫不缺項。這樣做可以幫助學生理清思路,有計劃、有條理地去分析骨髓象,書寫報告單,減少了學生走彎路的時間。
1.1一般情況下骨髓象書寫基本格式
①取材滿意、涂片染色良好。
②骨髓有核細胞增生程度,粒紅比值。
③粒系細胞增生程度,所占比值,以哪1-2階段的細胞為主,各階段細胞形態特征。
④紅系細胞增生程度,所占比值,以哪1-2階段的細胞為主,各階段細胞形態特征。成熟紅細胞形態特點。
⑤淋巴細胞及單核細胞比值、形態特征。
⑥全片見到巨核細胞多少個,以哪1-2階段細胞為主,各階段細胞形態特點。血小板分布及形態特點。
⑦全片未見寄生蟲及其他異常細胞。
1.2常見貧血的骨髓象書寫格式
在報告基本格式的基礎上,把“4、與3、”對換位置,并要求學生要特別重點描述幼紅細胞形態改變,以及成熟紅細胞形態改變特點,因為不同的貧血,幼紅細胞和成熟紅細胞形態都會出現不同的形態改變,這樣有助于貧血的分類和診斷。
1.3常見白血病的骨髓象書寫格式
在報告基本格式的基礎上,根據白血病發生在哪個系,就將哪個系的白血病細胞改變情況放在第3條描寫,第2條不用填寫粒紅比值,未發生白血病改變的其他系細胞受抑制。
例如,急性淋巴細胞白血病L1書寫格式:
①取材滿意、涂片染色良好。
②骨髓有核細胞增生極度活躍。
③淋巴系細胞增生極度活躍,以原始淋巴細胞為主,占65%,幼稚淋巴細胞占29%,原始淋巴細胞和幼稚淋巴細胞以小細胞為主,大小較一致,核型規則,細胞核染色質較粗,核仁1-2個,不太清楚,胞漿量少,退化細胞較多。
④紅系及粒系細胞受抑制,細胞形態基本正常。
⑤全片見巨核細胞2個,血小板少見,形態基本正常。
⑥全片未見寄生蟲及其他異常細胞。
2.認真批改學生寫的骨髓檢驗報告,找出問題,并及時在課堂上講評,指導學生及時糾正錯誤
一般情況下,就算是照著模板寫報告,學生前幾次所寫的報告都會出現不少問題。如,常有一些學生在報告中沒有描述成熟紅細胞形態特點,血小板分布和形態,出現粒紅比值計算結果錯誤,忽略第一條“取材滿意、涂片染色良好”及最后一條“全片未見寄生蟲及其他異常細胞”等。也會出現不知怎樣描述異常幼紅細胞形態特點和白血病細胞形態特點,難下診斷等問題。還會在報告文字描述中用一些口水話,寫錯字、涂改字等。因此,每次學生交來的骨髓檢驗報告,筆者都會認真批改,在報告上注明錯誤的地方,并把正確的答案也批在報告上。然后統計分析學生出現哪些問題,某種問題出現人數有多少等情況。在下一次的課堂上,筆者就會針對學生出現的問題一一講評,對學生每一次的進步都給予表揚。而且,每一次講評都做到講深講透。
2.1骨髓檢驗報告中學生問題分析:
2.1.1不填取材滿意、涂片染色良好
這一條有的學生會不寫,他們認為沒必要,但筆者要求一定要寫。因為這一條包含的意義在于檢驗醫師應該首先檢查臨床醫師送檢的骨髓片是否是成功抽取的骨髓涂片,如果取材滿意,才有對骨髓象進行分析的價值。隨后檢驗醫師對骨髓涂片要進行瑞特染色,染色良好的.片子,骨髓細胞形態才好識別,才能有效分類骨髓細胞。因此,這一條的書寫,可提醒學生要重視以上問題,對初學者來說是必須的。
2.1.2粒紅比值算錯
粒紅比值是指檢驗醫師所分類的骨髓細胞中全部粒系細胞數除以全部紅系細胞數所得的值,這個值可以反映骨髓中粒系細胞和紅系細胞所占比例是否在正常范圍,表達方式以正常骨髓粒紅比值為例,粒:紅=2-4:1,有的同學會寫成粒紅比值1:2-4,這樣一來,意義就完全不同了,一般是學生粗心大意和理解錯誤的結果,必須給予糾正,并說明道理。
2.1.3漏填成熟紅細胞形態特點
成熟紅細胞形態變化,在常見貧血的診斷中具有較大意義,不同的貧血,成熟紅細胞形態會發生不同的改變。如巨幼細胞性貧血,骨髓象中成熟紅細胞大小不均,以大細胞為主,紅細胞中央淡染區不明顯。因此,要求學生一定要重視成熟紅細胞形態描述。
2.1.4漏填血小板分布及形態特點
血小板數量的減少、形態的異常,會影響機體止血和凝血的功能,導致機體組織、器官、粘膜容易出血,或出血不止。如再生障礙性貧血和常見白血病等患者的骨髓中一般會出現不同程度的血小板減少,或形態異常,檢驗醫師對骨髓中血小板分布情況和形態改變的描述,可為臨床醫師提供患者出血原因,出血程度分析等參考依據,因此也很重要,要求學生不能省略或遺漏。
2.1.5忽略全片未見寄生蟲及其他異常細胞
有些寄生蟲病如瘧疾、弓形蟲病等,在骨髓中可發現相應的蟲體或寄生蟲滋養體等,如果是血液病合并寄生蟲感染患者,發現寄生蟲就可為臨床醫師提供有價值的診斷依據。
有些血液病可在骨髓中發現特殊異常細胞及病理細胞,如骨髓癌轉移、戈謝病、尼曼匹克病等,如在骨髓中發現異常的癌細胞、特殊形態的戈謝細胞及尼曼匹克細胞,對相應的疾病有絕對的診斷意義。因此,寫這一條,更重要的是提醒大家在觀察分析骨髓象時要同時注意觀察骨髓中是否存在寄生蟲,是否存在特殊異常細胞,不管有沒有,都要給臨床醫師一個明確的回答。
2.1.6異常幼紅細胞形態特點和白血病細胞形態特點描述不清
出現這個問題主要有兩個方面的原因:一是學生識別細胞能力不足,二是沒有掌握相關血液病的骨髓象特征,看不出特點,抓不住重點,不知該怎樣描述。針對這個問題,筆者便結合相應血液病骨髓象進行認真分析,如典型的缺鐵性貧血骨髓象幼紅細胞改變特點為,幼紅細胞胞體小,胞漿量少,胞漿邊緣不整齊、嗜堿性,中晚幼紅細胞核染色質濃縮、深染。同時加強骨髓細胞形態學改變投影演示、版圖描繪、顯微鏡下指導,提高學生識別骨髓細胞能力及對血液病骨髓象特征掌握程度。
2.1.7正確下診斷困難
每一份骨髓檢驗報告都需要下一個診斷意見,為臨床醫師提出細胞學診斷意見或可供臨床參考的意見。骨髓檢查診斷疾病的性質一般分為明確診斷、符合診斷、提示性診斷和排出性診斷等,不同的血液病應該以不同的方式下不同的診斷,這需要檢驗人員具有較高的檢驗技術、較豐富的臨床知識、以及將檢驗結果與臨床資料相結合綜合分析的能力。對于初學者學生來說,確實有一定困難。如巨幼細胞性貧血、各種白血病,通過骨髓檢查可作出明確性診斷,缺鐵性貧血只能做出符合性診斷等。但通過反復實驗、修改報告,反復講解相應血液病的診斷要點后,學生可以基本掌握常見血液病的診斷方法。
2.1.8在報告文字描述中用一些口水話,寫錯字、涂改字
骨髓檢驗報告要求內容簡明扼要,突出重點,使用書面、專業語言,而且不能有任何涂改痕跡,因此對學生報告中出現口水話、寫錯字、涂改字等現象,筆者要求一定要改正,要求學生反復書寫、反復修改報告,直到滿意為止。并將作為平時成績,納入學期考試總成績。
3.特別講解常用化學染色在常見血液病的診斷中的重要作用
常用化學染色有過氧化物酶染色(POX)、特異性酯酶染色(SE)、非特異性酯酶染色(α-NAE)及氟化鈉抑制實驗,鐵染色等。如POX、SE和α-NAE及氟化鈉抑制實驗對常見急性白血病(急性粒細胞白血病、急性單核細胞白血病、急性淋巴細胞白血病)的鑒別具有重要意義;鐵染色,對缺鐵性貧血診斷具有重要意義等。因此,要求學生在骨髓檢驗報告單中,做了化學染色的,必須填寫化學染色結果。
4.強調血片檢查在骨髓檢驗中的作用
許多血液病不僅骨髓象發生改變,而且血象也有相應改變。如常見急性白血病,不僅骨髓象可見到大量原始、幼稚白血病細胞,血片中也可查到大量一般絕對見不到的異常原始、幼稚細胞。因此,血涂片的檢查和描寫對血液病的診斷也很重要,學生也需要重視。
骨髓檢驗報告主要包括以下幾部分的內容:骨髓象、血象、細胞化學染色結果、診斷意見及建議。筆者通過以上幾個方面的反復教學,學生可在畢業前基本掌握常見血液病的骨髓檢驗報告書寫方法,并正確下診斷,為學生將來服務社會奠定了良好基礎。
生物實驗報告12
一、實驗報告的特點
1.實錄性實驗報告是實驗研究工作的如實記錄。內容包括整個實驗的主要過程,如實驗步驟、方法、實驗結果等。
2.科學性科技實驗報告既可以描述創新的內容,又可以記述重復實驗的工作。另外,實驗報告可以不要求具有明確的結論,只要對科學研究有參考或借鑒價值,無論結果是否達到預期要求,都可以寫成科學實驗報告。
3.目的性以如實記載實驗過程與結果為目的的所有科學實驗工作都可以寫成科技實驗報告
4.規范性一般的實驗報告如分析報告、教學中的實(試)驗報告、病理化驗單等,內容比較單一,而且項目固定,并按一定的格式印成表,由實驗者根據要求逐項填寫;比較復雜的實驗,要按一定的格式寫成實驗報告,其寫作方法具有特定的規范性。
二、實驗報告的種類
1.教學實驗報告這類實驗報告主要指理工科學生撰寫的實驗報告。重復科學技術史上前人已做過的實驗,目的是為了驗證某一學科定律或結論,訓練學生的動手能力和表達能力。其實驗步驟和方法一般是由教師自己擬定的,只不過是教學中的一個環節。這種實驗報告通常印制成表格,由實驗者逐項填寫。它是重復前人已做過的實驗,不具有學術價值。
三、實驗報告的格式寫法
實驗報告的寫作格式主要包括以下幾個部分:
1.標題即實驗或試驗項目的名稱。有時在項目之前加“關于”兩字。如“關于xxx的實驗報告”。實驗報告標題要力求明確、醒目,集中映實驗的內容。
2.摘要摘要是對報告內容不加注釋和評論的簡短陳述,內容具有立性、自含性,即不閱讀報告的全文,就能獲得必要的信息。也供文摘等二次文獻采用。寫摘要要注意:一般應說明實驗的目的、方法、結果和最終結論等;一般不用圖、表、化學結構式等;字數一般不超過200字;位于正文之前。
3正文
(1)引言。引言部分應是一系列間題的說明,如:研究的對象、實驗的意義和作用;此前該項工作的發展概況以及存在的問題;本實驗要達到的目標,等等。引言要使用概括性的語言敘述,較重要的地方才略作說明,而且點到為止。
(2)主體。
①實驗原理。實驗原理是進行科學實驗的理論依據,因此,在寫作時要做到細致準確。其內容主要包括:簡要介紹實驗涉及的主要概念、主要定律、公式等。原理部分的文字應做到簡明、清晰,易懂。對于比較復雜和比較新穎的實驗,或者考慮到讀者并非都是專家的情況下,可以對實驗所依據的理論作簡要的說明。否則,原理部分可以省略
②實驗設備和方法步驟。實驗設備是實驗報告中比較重要的部分。有關實驗設備應說明其原理、結構、型號、性能,若有自主設計制造的設備,還要附必要的圖紙和表格,另外還要敘述實驗的條件和對實驗的具體要求。
實驗方法是實驗能否成功的必要條件之一。在寫作時要敘述得全面完整、準確無誤。在說明實驗裝置時,一般按空間順序來表述,說明操作程序時,般按時間順序來表述。
化學實驗中的試劑,應標明形態、濃度、成分等。③結果與討論。這部分是實驗報告的主體,也是讀者最為關注的實質性內容,應力爭寫好。實驗結果一般都用專業術語表述,引用的數字要真實,報告中的'圖表、數字要符合規范要求。如果實驗結果的記錄失真,將使實驗報告喪失科學價值。
討論就是從理論上對實驗所得結果進行分析、解釋,闡明結果的必然性。通常是分條進行討論,要求簡短,這也是實驗報告與實驗型論文的區別所在。報告討論的內容可包括:對實驗結果進行具體分析、說明影響實驗的根本因素、實驗結果的適用范圍及與理論結果的差別等。
(3)結論即對實驗結果進行總結評價,同時逐條列出實驗結果。應當用簡練、肯定的語言表達,必要時可引用關鍵性數據,但不再列圖表,不再提出新的事實、證據或材料。
4.致謝致謝是對實驗中給予助的單位或個人表示感謝。
實驗報告的構成并非千篇一律,由于實驗有定性實驗、定量實驗、結構分析實驗、析因實驗、對照實驗、模擬實驗等類型,因此,寫作時重點應有所不同。以上六項構成項目,只是實驗報告的基本構成內容。
四、實驗報告的寫作要求
I.做好實驗是前提要寫好實驗報告,實驗前一定要熟悉實驗原理、儀器設備、操作方法。在實驗中,要按步驟操作,細心觀察現象,正確測取數據,認真做好記錄。
2.做好實驗后的綜合與分析對實驗過程中的各種現象以及最后的結果都要逐一分析,通過分析,揭示出其本質的東西,這也是寫好實驗報告的關鍵。并在此分析的基礎上進一步綜合加工,才真正_卜升到理性認識,使理論與實驗統一起來。這一過程就是實驗報告由起草到定稿的過程。
3.堅持客觀嚴肅的寫作態度不經重復實驗不得修改數據;在處理數據時,遇到誤差分析和有效數字位數的問題,應按有關要求執行。
4.運用準確嚴密的表達方式
(1)充分利用圖表。圖表比文字敘述要直觀、簡潔、明了。
(2)說明的準確性、條理性。實驗報告的主要表達方式是說明,要求說明準確,言之有序。即在說明物質的性狀時要定性、定量;在說明實驗設備、步驟和方法時要條理分明。
生物實驗報告13
一、實驗目的:
1、掌握顯示細胞中過氧化物酶反應的原理和方法。
2、了解細胞凋亡的生物學意義
3、掌握凋亡細胞的形態學檢測方法
二、實驗原理:
1、細胞內的過氧化物酶能把許多胺類氧化為有色化合物,用聯苯胺處理標本,細胞內的過氧化物酶能把聯苯胺氧化為藍色的聯苯胺藍,進而變為棕色產物,因而可以根據顏色反應來判定過氧化物酶的有無或多少。中間產物藍色聯苯胺是不穩定的,無需酶的`參加即可氧化為棕色化合物。
2、細胞凋亡是指細胞在生理或病理條件下,遵循自身的程序,自己結束其生命的過程。它是一個主動的、高度有序的,基因控制的,一系列酶參與的過程。
3、凋亡細胞形態學特征是:體積變小,細胞質濃縮;細胞核發生染色質凝聚和聚集于核膜周圍(邊緣化);細胞膜有小泡狀形成;晚期細胞膜內陷形成大小不同的凋亡小體;根據細胞凋亡形態學特征進行顯微觀察是檢測細胞凋亡的一種直觀、可靠的方法。
三、實驗步驟:
細胞中過氧化物酶的顯示
1、在載片上滴一滴PBS緩沖液;
2、取骨髓細胞:用斷頸法處死小鼠,立即剪取后肢,去除肌肉,剝出后肢股骨,剪開股骨一端,用牙簽尖的一端插入剪開的小孔中,摳取少許骨髓細胞置滴有PBS的載片上;
3、涂片:用另一玻片將骨髓細胞沿一個方向涂布推開,室溫晾干;
4、媒染:在涂片上滴0.5%硫酸銅液,以蓋滿涂片為宜,處理30秒-1分鐘。
5、傾去硫酸銅液,直接滴入聯苯胺混合液反應6分鐘(以蓋滿涂片為宜)
6、清水沖洗,番紅復染2min。
7、鏡檢:清水沖洗,室溫晾干,先低倍鏡下觀察,后換高倍鏡下觀察(油鏡100×)
細胞凋亡的形態學檢測與觀察吉姆薩染色:
1、取細胞爬片置于小培養皿中(有細胞面朝上)
2、生理鹽水輕輕漂洗細胞
3、95%乙醇固定5min
4、PBS緩沖液洗2次
5、吉姆薩染色液染色5min
6、蒸餾水輕輕洗去染液
7、普通光學顯微鏡下觀察。
吖啶橙染色:
1、取細胞爬片置于小培養皿中(有細胞面朝上)
2、生理鹽水輕輕漂洗細胞
3、甲醇:冰醋酸(3:1)固定5min
4、PBS緩沖液洗2次每次1min
5、0.01%吖啶橙染色液在避光環境下染色5min6、蒸餾水輕輕洗去染液
6、選用藍光激發濾片在熒光顯微鏡下觀察。
四、結果與分析:
根據隨機選擇的幾個視野的統計,該樣品的細胞凋亡率=227/506×100=44.9
Hela細胞凋亡過程中核染色質的形態變化(吖啶橙染色)
五、思考題:
1、細胞凋亡的調控機制
細胞凋亡是一個受基因調控、眾多細胞膜受體和胞漿蛋白參與的細胞主動自殺過程,其觸發因素多種多樣,包括細胞內誘導因子和抑制因子對細胞凋亡的調控。
2、細胞凋亡的特征
凋亡細胞形態學特征是:體積變小,細胞質濃縮;細胞核發生染色質凝聚和聚集于核膜周圍(邊緣化);細胞膜有小泡狀形成;晚期細胞膜內陷形成大小不同的凋亡小體。
3、研究細胞凋亡的方法
定性的研究方法:常規瓊脂糖凝膠電泳、脈沖場倒轉瓊脂糖凝膠電泳、形態學觀察(普通光學顯微鏡、透射電鏡、熒光顯微鏡)
定量或半定量的研究方法:各種流式細胞儀方法、原位末端標記法、ELISA定量瓊脂糖凝膠電泳。
生物實驗報告14
醫學生物化學是一門為醫學院各專業開設的主干課程,是聯系基礎醫學與臨床醫學的重要學科,在醫學教學中具有重要作用。醫學生物化學實驗是一門可以自成體系,有其豐富的理論、技術內容的課程,在醫學生物化學教學中占有突出的地位,它不僅可以以生動形象的實驗現象幫助學生加深掌握醫學生物化學的理論知識,更重要的是讓學生掌握實驗中的各種技術的基本原理,掌握常規實驗儀器的主要性能與操作方法,培養學生在實驗過程中發現問題、思考問題、分析問題和解決問題的能力。
一、傳統的醫學生物化學實驗教學的弊端
我們以前進行的生物化學實驗,其實驗內容和考核方法都有弊端。
1.實驗內容弊端。我們以前給學生開設的實驗基本上都是驗證性實驗,一般是理論課講述了相關知識,接著安排這個知識點的實驗課。例如,理論課講述了蛋白質的理化性質,這次實驗課的內容就為“蛋白質的沉淀凝固”。課本上的理論都是前人的實驗結果,對于這樣的實驗學生認為缺乏挑戰性,實驗操作中也不主動思考。醫學生物化學實驗課程的驗證性實驗太多,不能很好地發揮學生的主觀能動性,也不利于學生思維能力和創造能力的培養。
2.考核方法的弊端。我們以前的醫學生物化學實驗考核成績主要是學生的實驗報告,忽略了學生在寫實驗報告的過程中存在抄襲現象。有的學生實驗操作能力很差,抄襲別人的實驗報告也可得高分。這種考核標準導致學生不重視實驗過程,只注重實驗報告的書寫,不利于培養學生的動手能力,不利于培養學生分析問題和解決問題的能力。
二、生物化學實驗教學改革
1.構建新的實驗教學內容。對實驗項目進行改革。我們以前醫學生物化學實驗內容:生物化學實驗的基本知識與基本技能、蛋白質的沉淀和凝固、雙縮脲法測定蛋白質的含量、還原糖含量的測定、氨基酸紙層析、尿淀粉酶活性的測定、血清尿素氮含量的測定、血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳、DNA的提取與鑒定、丙二酸對琥珀酸脫氫酶的抑制作用等。改革后的實驗內為:蛋白質含量的測定(考馬斯亮藍法)、氨基酸紙層析、酶促反應動力學實驗、丙二酸對琥珀酸脫氫酶的抑制作用、葡萄糖含量的測定(葡萄糖氧化酶法)、血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳、組織DNA的提取與鑒定、堿性磷酸酶提取與鑒定等。經過對實驗項目的改革,去掉部分淘汰實驗和部分驗證性實驗,增加了分子生物學實驗比例,增加了綜合設計性實驗項目。
綜合設計性實驗,就是在實踐教學中,教師提出實驗的總體要求,讓學生自己設計實驗。學生先進行分組,實驗小組的各成員經過查閱文獻資料、設計實驗所用試劑儀器、設計實驗步驟、進行預實驗、制作幻燈片、小組課堂匯報這樣的程序完成整個綜合設計性實驗。實驗成功了,學生會有極大的成就感;如果有些實驗不成功,帶教老師進行引導,分析失敗原因,再重復實驗。這樣,每位學生在整個實驗中一直處于主體地位,避免了個別學生不動手操作、抄襲實驗報告等不良行為,從而達到培養學生的創新意識,以及學生的動手、動腦能力的目的。
2.自編生化實驗指導教材。我們以前所使用的實驗教材有的內容目前已淘汰,有的內容不適合醫學生,因此,我們參考了周愛儒主編的《生物化學》,藥立波主編的《醫學分子生物學》,趙亞華主編的'《生物化學與分子生物學實驗技術教程》,劉吉民主編的《醫學生物化學與分子生物學實驗教程》等,結合我校的實際情況,編寫了《醫學生物化學實驗技術》實驗講義。對醫學生物化學實驗的基本實驗內容進行精心的取舍,保留經典的實驗內容如葡萄糖含量的測定、氨基酸紙層析、血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳等外,增加了綜合設計性實驗如組織DNA的提取與鑒定、堿性磷酸酶的提取與鑒定實驗等的比例。這樣一方面學生可以掌握生物化學實驗的分光技術、層析技術、電泳技術等基本實驗技術,另一方面通過綜合設計性實驗培養學生的創新能力,提高學生的綜合素質。
3.讓學生自己準備實驗。傳統的生物化學實驗教學注重知識傳遞和操作能力的培養。上實驗時,老師先講實驗原理、操作步驟、可能出現的結果,準備好試劑,調試好實驗儀器,學生按部就班地操作即可,完全剝奪了學生的思維空間。讓學生自己準備實驗,學生可以全身心地投入到整個實驗的各個準備階段,例如試劑的配制、試劑的分裝、儀器的調試等,在準備的過程中會出現各種問題,學生們在老師的指導下就要去分析為什么會出現這些問題,如何去解決這些問題。學生自己準備實驗可以使學生獲得從書本上學不到的知識和能力,從實驗中得到更多的收獲。
4.先做后講。我們以前的實驗大多為驗證性實驗,一般是老師講完后學生再做,有時為了得到明確的實驗結果教師參與過多,學生對實驗印象不深。為此,我們決定采用先做后講的歸納式教學方法,這種方法更適用于綜合設計性實驗,讓學生一邊做實驗,一邊觀察討論,整個實驗做完后,讓學生總結規律,老師只做歸納性、提高式講解。這樣的教學方法可以引導學生感知知識的發生過程,體驗獲得真知的喜悅。
5.應用多媒體技術豐富實驗課教學。醫學生物化學這門課的知識很抽象,教師講課難度較大。多媒體技術通過文字、圖像、動畫和聲音等傳遞信息。應用多媒體技術進行醫學生物化學的教學,可以生動、形象地傳遞較多的知識,還可以幫助師生共同突破教學中的重點和難點,極大地提高教學質量。我們以前上實驗課時都采用黑板板書,操作也只做一些簡單的示范。由于班級人數較多,有一些學生看不到操作示范。現在我們把多媒體技術也運用在醫學生物化學實驗課堂上,教師把實驗原理、實驗試劑、實驗儀器、操作步驟等做成幻燈片,比板書看起來更清晰,把實驗操作也錄成視頻,做實驗前先看一段實驗操作步驟的錄像,然后再操作,避免了學生看不到操作示范,這樣可提高學生實驗動手能力。
6.開放實驗室。為了提高學生的實驗操作能力,我們決定進行實驗室開放,便于學生進行綜合設計性實驗的預實驗及學生參與教師科研的實驗。
(1)帶教老師給學生講解一些常用實驗儀器的使用方法及注意事項,例如:電子天平、臺式低速離心機、超低溫離心機、恒溫培養箱、水浴箱、電泳儀、烤箱、手提式不銹鋼消毒器、分光光度計、PCR儀等。由實驗技術人員管理、維護實驗室及其儀器。
(2)實驗室開放時間:周一到周五從18∶00~22∶00,周六、周日全天開放。帶教老師和實驗技術人員輪流值班,隨時解決學生實驗過程中的問題。
生物實驗報告15
考點提示:
(1)雞血能用豬血代替嗎?為什么?不能,因為哺乳動物的紅細胞中沒有細胞核,不能提取DNA.
(2)雞血中為何要加檸檬酸鈉?為何要棄去雞血細胞的上清液?
防止血液凝固;因為上清液是血漿,不含細胞和DNA.
(3)脹破細胞的方法?能用生理鹽水嗎?
向血細胞中加入蒸餾水,使細胞大量吸水而脹破;不能用生理鹽水,因為血細胞在蒸餾水中不能吸收水分。
(4)該實驗中應用玻璃燒杯還是塑料燒杯?為什么?用塑料燒杯,因為玻璃燒杯容易吸附DNA.
(5)前后三次過濾時,所用紗布的層數分別是多少?為什么?
第一次用一層紗布,有利于核物質透過紗布進入濾液;第二次用多層紗布,能防止DNA絲狀物透過紗布進入濾液;第三次用兩層紗布,既有利于DNA透過紗布,又能防止其它雜質透過紗布。
(6)若實驗中所得黏稠物太少,其原因是什么?第一次加蒸餾水過少,細胞未充分脹破;第二次加蒸餾水過多或過少;第一次過濾用了多層紗布;第二次過濾用了一層紗布。
(7)兩次加入蒸餾水的目的分別是什么?
第一次是為了使血細胞吸水脹破;第二次是為了降低氯化鈉的濃度,有利于DNA有析出。
(8)實驗中攪拌溶液時,為何總要沿一個方向攪拌?防止DNA分子受到損傷。
(9)兩次析出DNA的方法分別是什么?原理分別是什么?
第一次是加蒸餾水,降低氯化鈉的濃度,促使DNA析出;第二次是加入冷酒精,因為DNA不溶于酒精溶液。
(10)三次溶解DNA的液體分別是什么?原理分別是什么?
第一次、第二次都是用濃度為2mol/L的氯化鈉溶液,第三次用的是0.015mol/L(或2mol/L)的氯化鈉溶液。其原理是DNA在氯化鈉中的`溶解度,是隨著氯化鈉的濃度的變化而改變的。當氯化鈉的物質的量濃度為0.14mol/L時,DNA的溶解度最低。2mol/L的氯化鈉溶液和0.015mol/L的氯化鈉溶液對DNA的溶解度都比較高。
(11)鑒定DNA時為何要用兩支試管?其現象分別是什么?
其中不加DNA的試管起對照作用。該試管溶液不變色,另一支加有DNA的試管溶液變藍色。
實驗九探究酵母菌的呼吸方式
1、原理:酵母菌在有氧條件下進行有氧呼吸,產生二氧化碳和水:
C6H12O6+6O2+6H2O6→CO2+12H2O+能量
在無氧條件下進行無氧呼吸,產生酒精和少量二氧化碳:
C6H12O6→2C2H5OH+2CO2+少量能量
2、裝置:(見課本)
3、檢測:(1)檢測CO2的產生:使澄清石灰水變渾濁,或使溴麝香草酚藍水溶液由藍變綠再變黃。
(2)檢測酒精的產生:橙色的重鉻酸鉀溶液,在酸性條件下與酒精發生反應,變成灰綠色。
高一生物易錯知識點
1.使能量持續高效的流向對人類最有意義的部分
2.能量在2個營養級上傳遞效率在10%—20%
3.單向流動逐級遞減
4.真菌PH5.0—6.0細菌PH6.5—7.5放線菌PH7.5—8.5
5.物質作為能量的載體使能量沿食物鏈食物網流動
6.物質可以循環,能量不可以循環
7.河流受污染后,能夠通過物理沉降化學分解微生物分解,很快消除污染
8.生態系統的結構:生態系統的成分+食物鏈食物網
9.淋巴因子的成分是糖蛋白
病毒衣殼的是1—6多肽分子個
原核細胞的細胞壁:肽聚糖
10.過敏:抗體吸附在皮膚,黏膜,血液中的某些細胞表面,再次進入人體后使細胞釋放組織胺等物質.
11.生產者所固定的太陽能總量為流入該食物鏈的總能量
12.效應B細胞沒有識別功能
13.萌發時吸水多少看蛋白質多少
大豆油根瘤菌不用氮肥
脫氨基主要在肝臟但也可以在其他細胞內進行
14.水腫:組織液濃度高于血液
15.尿素是有機物,氨基酸完全氧化分解時產生有機物
16.是否需要轉氨基是看身體需不需要
17.藍藻:原核生物,無質粒
酵母菌:真核生物,有質粒
高爾基體合成纖維素等
tRNA含CHONPS
18.生物導彈是單克隆抗體是蛋白質
19.淋巴因子:白細胞介素
20.原腸胚的形成與囊胚的分裂和分化有關
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